【摘 要】
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目的:探讨IL-1β诱导的人软骨细胞C-28/I2骨关节炎模型的造模浓度;筛选止骨增生丸含药血清对C-28/I2骨关节炎模型细胞最佳有效浓度;探寻在有效浓度下新止骨增生丸含药血清对IL-1β诱导的C-28/I2骨关节炎模型分泌IL-6和TNF-α水平的影响以及J AK2蛋白表达水平和磷酸化水平与负反馈调节蛋白SOCS1的表达情况。从而观察新止骨增生丸含药血清对JAK-STAT信号通路的影响,探讨新
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目的:探讨IL-1β诱导的人软骨细胞C-28/I2骨关节炎模型的造模浓度;筛选止骨增生丸含药血清对C-28/I2骨关节炎模型细胞最佳有效浓度;探寻在有效浓度下新止骨增生丸含药血清对IL-1β诱导的C-28/I2骨关节炎模型分泌IL-6和TNF-α水平的影响以及J AK2蛋白表达水平和磷酸化水平与负反馈调节蛋白SOCS1的表达情况。从而观察新止骨增生丸含药血清对JAK-STAT信号通路的影响,探讨新止骨增生丸对骨关节炎的作用机制。材料与方法:软骨细胞稳定传代后将细胞分为空白组（Blank Control,BC）、对照组（Control Group,CG）;不同浓度的IL-1β组分别为浓度1（C1）、浓度2（C2）、浓度3（C3）、浓度4（C4）),共计6组,干预C-28/I2。24h后CCK-8法检测C-28/I2的增殖活性,筛选出制备骨关节软骨细胞模型的最佳浓度,制备骨关节炎模型软骨细胞。40只6月龄的雌性新西兰白兔体重（3000±50g）分为两组,分别予新止骨增生丸悬液与等量生理盐水连续2周灌胃,从腹主动脉中采集血样以制备用于新止骨增生丸的含药血清。将细胞分为空白组（Blank Control,BC）、对照组（Control Check,CK）、不同浓度的含药血清组:浓度1（M1）、浓度2（M2）、浓度3（M3）、浓度4（M4）。共计6组。干预C-28/I2后用CCK-8法测定新止骨增生丸含药血清各浓度组的细胞活性,并绘制增殖曲线,筛选出含药血清干预C-28/I2的最佳浓度。将稳定传代的软骨细胞加入各浓度试剂及药品进行干预,分为Con（空白组）,Mod（模型组）,XZG（新止骨增生丸含药血清组）,Cer（JAK抑制剂组）,XZG+Cer（新止骨增生丸含药血清+JAK抑制剂组）,干预结束后,通过ELISA检测,测定各组C-28/I2细胞的培养上清液中TNF-α和IL-6的分泌;Westernblot法检测各组细胞中JAK2的蛋白表达情况及磷酸化水平,以及SOCS1蛋白的表达情况,使用Image-J软件检测条带灰度值所有检测数据用SPSS22.0统计软件进行统计学分析。结果:1.IL-1β浓度为10ng/ml时,C-28/I2细胞OD值与对照组相比具有统计学差异（p<0.05）。2.含药血清浓度为10%时,C-28/I2细胞OD值与对照组相比具有统计学差异（p<0.05）。3.与Mod组比较,XZG组炎性因子TNF-α和IL-6含量减少且具有显著差异（p<0.01）。4.与Mod组比较XZG组JAK2及p-JAK2相对蛋白的表达具有显著差异（p<0.01）;SOCS1蛋白表达升高且差异具有统计学意义（p<0.05）。结论:1 IL-1β可抑制C-28/I2细胞增殖,骨关节炎造模浓度为10ng/ml。2新止骨增生丸含药血清可促进C-28/I2细胞的增殖,最佳给药浓度为10%。3新止骨增生丸可减少C-28/I2细胞炎性因子IL-6及TNF-α分泌。4新止骨增生丸可抑制JAK2蛋白的表达和JAK2磷酸化并激活负反馈蛋白SOCS1的表达从而抑制JAK/STAT信号传导路径。新止骨增生丸可能通过减少炎性因子IL-6及TNF-α分泌量,抑制了JAK2蛋白的表达和JAK2磷酸化并激活负反馈蛋白SOCS1的表达抑制JAK/STAT信号传导路径,从而抑制了软骨细胞的变性及凋亡。
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