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目的:观察益元灸对骶髓损伤（sacral spinal cord injury,SSCI）后逼尿肌无反射型神经源性膀胱（neurogenic bladder,NB）大鼠膀胱功能、脊髓和膀胱组织形态以及脊髓组织内Nestin、Tuj-1表达及Wnt/β-catenin通路相关蛋白的影响,探讨益元灸改善大鼠骶髓损伤后逼尿肌无反射型神经源性膀胱功能障碍的作用机制。方法:随机将84只雌性SD大鼠分为假手术组12只、造模组72只。造模组采用改良的Hassan Shaker脊髓横断法建立大鼠骶髓损伤模型,术后第15d采用尿流动力学检测选出逼尿肌无反射型神经源性膀胱大鼠模型,再随机抽取48只分为模型组、抑制剂组、益元灸组、益元灸+抑制剂组,各12只。抑制剂组大鼠腹腔注射Wnt/β-catenin信号通路抑制剂IWR-1,每日一次。益元灸组采用益元灸“神阙”、“关元”的方法,每穴每次20min,每日一次,共治疗14天。益元灸+抑制剂组大鼠腹腔注射Wnt/β-catenin信号通路抑制剂IWR-1,每日一次,然后与益元灸组进行相同的治疗。治疗结束后,利用尿流动力学检测评价大鼠膀胱功能,采用HE染色观察各组大鼠脊髓和膀胱组织病理形态,通过免疫组织化学检测观察脊髓组织中Nestin、Tuj-1和Wnt/β-catenin通路相关蛋白（Wnt-3a、β-catenin、GSK-3β）的阳性表达,采用实时荧光定量PCR技术（RT-PCR）和免疫蛋白印迹（Western blot）检测各组脊髓组织中Wnt-3a、β-catenin、GSK-3β的表达变化,并进行统计学分析。结果:1.尿流动力学结果:模型组大鼠最大膀胱容量、漏尿点压力和膀胱顺应性相比假手术组显著升高（P＜0.01）。与模型组相比:抑制剂组大鼠最大膀胱容量、漏尿点压力和膀胱顺应性增加（P＜0.01）;益元灸组大鼠最大膀胱容量减少,漏尿点压力和膀胱顺应性均降低（P＜0.01）。益元灸+抑制剂组大鼠最大膀胱容量、漏尿点压和膀胱顺应性均低于抑制剂组（P＜0.05,P＜0.01）,高于益元灸组（P＜0.05,P＜0.01）。2.HE染色结果:假手术组大鼠脊髓组织形态完整,膀胱逼尿肌组织排列有序。模型组大鼠脊髓镜下观察组织结构破坏明显,神经元数量减少,有大量红细胞聚集出血;膀胱逼尿肌组织上皮细胞间隙增大,排列紊乱。与模型组比较,抑制剂组脊髓组织和膀胱组织形态破坏更加严重;益元灸组大鼠脊髓组织和膀胱组织的炎症、水肿、出血程度程度均有所减轻,细胞形态有所好转,神经元数量增加,空泡变性较少,细胞排列较为整齐。益元灸+抑制剂组相比抑制剂组脊髓组织和膀胱组织形态均有所改善。3.免疫组化结果:与假手术组相比,模型组的Nestin、Tuj-1、Wnt-3a和β-catenin阳性表达降低（P＜0.01）,而GSK-3β表达增加（P＜0.01）;模型组加入抑制剂后Nestin、Tuj-1、Wnt-3a和β-catenin的阳性表达降低（P＜0.05）,GSK-3β表达增加（P＜0.05）;与模型组比较,益元灸组Nestin、Tuj-1、Wnt-3a和β-catenin的阳性表达增高（P＜0.05）,GSK-3β表达明显下降（P＜0.01）;与益元灸组相比,益元灸+抑制剂组Nestin、Tuj-1、Wnt-3a和β-catenin阳性表达降低（P＜0.05）,GSK-3β表达有所增加（P＜0.05）;益元灸+抑制剂组与抑制剂组相比Nestin、Tuj-1、Wnt-3a和β-catenin表达有所升高（P＜0.05）,GSK-3β表达有所降低（P＜0.05）。4.RT-PCR结果:模型组与假手术组相比Wnt-3a、β-catenin mRNA水平降低,而GSK-3βmRNA水平增加（P＜0.01）。与模型组比较,抑制剂组Wnt-3a、β-catenin mRNA表达降低,而GSK-3βmRNA表达增加（P＜0.05）;益元灸组Wnt-3a、β-catenin mRNA表达明显增加,GSK-3βmRNA表达量明显下降（P＜0.01）。与益元灸组比较,益元灸+抑制剂组Wnt-3a、β-catenin mRNA表达量有所下降（P＜0.05）,GSK-3βmRNA表达量有所增加（P＜0.01）。益元灸+抑制剂组与抑制剂组相比Wnt-3a和β-catenin mRNA表达增加（P＜0.05,P＜0.01）,而GSK-3βmRNA表达减少（P＜0.01）。5.Western blot结果:与假手术组相比,模型组中Wnt-3a、β-catenin蛋白表达降低（P＜0.05,P＜0.01）,GSK-3β蛋白表达增加（P＜0.01）。与模型组比较,抑制剂组Wnt-3a、β-catenin蛋白表达降低,而GSK-3β表达增加;益元灸组Wnt-3a、β-catenin蛋白水平明显增加,GSK-3β表达下降（P＜0.01）。与益元灸组比较,益元灸+抑制剂组Wnt-3a、β-catenin蛋白水平降低（P＜0.05,P＜0.01）,GSK-3β表达有所增加（P＜0.01）。比较益元灸+抑制剂组和抑制剂组的蛋白表达发现,益元灸+抑制剂组Wnt-3a和β-catenin表达增加（P＜0.05,P＜0.01）,而GSK-3β表达减少（P＜0.05）。结论:益元灸法能够减轻骶髓损伤后逼尿肌无反射型NB大鼠的尿潴留症状,改善膀胱功能,其作用机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关,通过促进脊髓损伤区域的神经修复,进而恢复支配排尿的副交感神经系统功能。