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前言 支气管哮喘（简称哮喘）是由多种因素共同参与的气道慢性炎症。近年来，气道的神经源性炎症日益引起关注。神经源性炎症是指由气道感觉神经末梢释放的感觉神经肽所介导的炎症。参与哮喘发病的感觉神经肽主要有神经激肽A（NKA）、P物质（SP）、神经激肽B（NKB）。他们主要通过引起平滑肌收缩，增加血浆外渗，促进粘液高分泌及促进炎症介质释放等作用参与哮喘的病理生理过程。随着人们对哮喘神经机制认识的日益加深，人们发现NKA、SP、NKB并非直接发挥作用，而是通过特异的细胞受体而发挥生物活性。目前主要有3种感觉神经肽受体亚型被鉴定出，即NK1、NK2和NK3受体。其中，NKA主要通过NK2受体发挥生物学活性，同哮喘气道高反应的形成关系密切，目前被认为是哮喘的神经机制中最重要的受体之一。有学者认为速激肽及相关受体含量增加以及二者的相互作用可能是气道高反应性及慢性炎症存在的原因。因此，研究速激肽受体意义更大。既往多采用免疫组化染色及放射自显影技术研究NK2受体，采用分子生物学方法的研究国内外较少。本实验采用原位杂交和反转最多聚酶链式反应着重研究NK2受体mRNA在哮喘豚鼠气管和肺组织中的分布和相对含量。临床上普遍采用的治疗哮喘的方法为GINA提出的吸人激素疗法，激素治疗能否下调神经肽受体（如NK2受体）尚不清楚。此外，本实验还研究了吸入糖皮质激素（如布地奈德悬浊液）对NK2受体的作用（是否下调NK2受体）。对神经肽受体的深入研究有助于完善哮喘的发病机制，为现有的吸入治疗提供新依据。 材料与方法 1．动物模型的制作及分组：按国内外通用的卵蛋白吸入法制作豚鼠哮喘模型。将单只豚鼠置于半封闭的容器中，于第1，4，7天分别超声雾化吸人1％卵蛋白各3分钟使其致敏，然后将同条件豚鼠按雌雄各半随机分为以下各组进行研究：①哮喘组：第21天超声雾化吸入2％卵蛋白5分钟激发诱喘，诱喘成功24小时后统一取材;②吸人激素组:于诱喘前7天开始，每只豚鼠面罩吸人糖皮质激素（布地奈地悬浊液，商品名:普米克令舒）5分钟（每日二次，0.25m岁次）至诱喘当天（共8天），诱喘24小时后统一取材（同哮喘组）。③正常对照组:用生理盐水替代卵蛋白及糖皮质激素吸人（方法见上）。 每组10只豚鼠，种属，月龄，体重一致。 2.动物标本取材:常规诱喘后24小时内统一取材（研究组与对照组取材时间一致），取材前以戊巴比妥腹腔注射麻醉。以专用器械（高温高压灭菌）取器官及肺组织，置高温高压灭菌管中一70℃冻存;另取部分组织用含DEPC的4%多聚甲醛固定，制作石蜡切片。 3.实验方法 1)原位杂交检测:试剂盒采用针对NK:一R的寡核昔酸探针，经地高辛标记。在肺组织石蜡切片上显示NKZ一R的mRNA表达。 2)RT一PCR测定:用TRIZOL总RNA提取试剂提取肺组织mRNA，反转录合成cDNA第一链，扩增NK:一R产物，检测肺组织中NK:一R mRNA表达的相对含量。 4.结果判定及数据处理 1)NK:一R原位杂交结果:在显微镜下观察其表达产物的部位及强度，有表达的细胞浆着色呈黄色。对原位杂交切片进行图像分析:应用美国Meta Mo甲h/Dplo/Bx41，Meta Imageing series 4.6软件对三组光密度作为NKZmRNA相对含量进行分析。所得数据进行t检验及相关统计学分析。 2)NK:一R RT一PCR结果:凝胶电泳后，用凝胶成像分析系统扫描扩增带，以内参照标准化NK:一R值，得到NK:一R的相对含量。结果以又土s表示，样本均数做t检验。结果 1光镜下哮喘豚鼠气管、支气管及肺组织中均可见到有NKZ受体mRNA的表达明显，着色呈棕黄色，主要分布于气管、支气管的纤毛粘膜下平滑肌周围;肺实质和间质及血管周围也有少量表达。正常对照组在上述部位表达微弱。 2哮喘豚鼠气管粘膜下和平滑肌周围NKZ受体mRNA相对含量较正常对照组明显升高（p<0.05）。 3哮喘豚鼠吸人糖皮质激素后，光镜下可见NKZ受体mRNA在哮喘豚鼠气管、支气管及肺组织中表达，但其着色及密度均明显减弱，甚至消失。 4哮喘豚鼠吸人糖皮质激素后，气管粘膜下和平滑肌周围NKZ受体mRNA相对含量较常规哮喘组明显减低（p<0.05）; 5哮喘豚鼠吸人糖皮质激素后，气管粘膜下和平滑肌周围NKZ受体mRNA相对含量较正常对照组无统计学差异，p>0.05; 6哮喘豚鼠肺组织中NKZ受体mRNA表达的相对含量较正常对照组显著增高，p<0.05 7吸人糖皮质激素组哮喘豚鼠肺组织中NKZ受体mRNA表达的相对含量较常规哮喘豚鼠显著减低，p<0.05 8哮喘豚鼠吸人糖皮质激素后其肺组织中NKZ受体mRNA表达的相对含量同正常对照组无统计学差异，p>0 .05;讨论 支气管哮喘（简称哮喘）是小儿常见的慢性肺部疾病，发病机制极其复杂。据2002年全球哮喘防治创议（global initrative for asthma GINA）认为哮喘是一种气道慢性炎症疾患，此中许多细胞和细胞组分起到重要作用，并伴有气道反应性的增加，呼吸道的神经调节可能参与气道炎症过程和气道口径的调节，呼吸道炎症和呼吸道神经调节的异常可能与哮喘的反复发作有关。在慢性呼吸道炎?