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目的研究小分子靶向EGFR酪氨酸激酶抑制剂与顺铂联合作用对于胃癌AGS细胞系的增殖、凋亡以及细胞周期的影响,初步探讨EGFR抑制剂作用下胃癌AGS细胞对顺铂化疗敏感性的影响及其可能存在的机制。方法体外培养人胃癌AGS细胞,CCK-8法检测EGFR抑制剂和顺铂各自对胃癌AGS细胞的增殖抑制作用,计算各自的IC50和IC20,选择其接近并低于IC20的药物浓度作为后续实验浓度,实验分为4组:对照组、单用顺铂组、单用EGFR抑制剂组、两药联用组,采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡和周期变化情况,RT-PCR检测EGFR、E-cadherin、caspase-3等基因的mRNA表达情况,Western Blot检测EGFR、Cleaved Caspase-3、AKT、p-AKT蛋白表达。以上所有试验均重复3次或以上。结果1.CCK-8结果显示不同浓度的顺铂对胃癌AGS细胞的增殖均具有抑制作用,且呈浓度依赖性,顺铂48h的IC50浓度为(12.04±0.13)mg/l、IC20约为(2.47±0.06)。不同浓度的EGFR抑制剂对胃癌AGS细胞的增殖也具有抑制作用,各浓度之间对胃癌AGS细胞的增殖抑制率无明显差别,选择EGFR抑制剂50uM/L,顺铂2mg/l的浓度作为后续实验浓度。2.与两种药物单独作用相比,两种药物联用的细胞增殖抑制率明显升高,差异有统计学意义。3.流式细胞仪检测凋亡及细胞周期的结果表明:与对照组相比,EGFR抑制剂和顺铂单独作用分别能促进胃癌AGS细胞凋亡;与两种药物单独作用相比,EGFR抑制剂与顺铂联用可增加胃癌AGS细胞调亡,差异有统计学意义;与对照组相比,EGFR抑制剂和顺铂均可使胃癌AGS细胞阻滞在G1/G0期;与两药单独作用相比,两药联用时胃癌AGS细胞G1/G0期细胞比例增多,S期细胞比例减少。4.RT-PCR结果显示:各组之间EGFR、E-cadherin基因mRNA表达无明显差异;相比对照组,EGFR抑制剂和顺铂单独作用及联合作用下capase-3基因mRNA表达均明显增加,与两药单独作用相比联合作用时capase-3基因mRNA表达无显著增加。5.Western Blot检测结果显示:对比对照组,EGFR抑制剂和顺铂单独及联合作用对EGFR、AKT蛋白的表达均无明显影响;与对照组相比,EGFR抑制剂和顺铂单独及联合作用均使蛋白cleaved capase-3升高;与EGFR抑制剂和顺铂单独作用组相比,两药联用时cleaved capase-3表达无明显差别;与对照组相比,EGFR抑制剂组和联合用药组p-AKT表达均降低,单用顺铂组对p-AKT表达影响不大。结论1.小分子靶向EGFR酪氨酸激酶抑制剂与顺铂联合作用能够增加胃癌AGS细胞系的增殖抑制率,促进细胞凋亡及细胞周期的阻滞。2.小分子靶向EGFR酪氨酸激酶抑制剂作用下胃癌AGS细胞对顺铂化疗敏感性增加的具体机制与蛋白EGFR、AKT、cleaved capase-3的表达无关,可能和p-AKT表达相关。