某市鸡场硫化氢气体含量调查及其对鸡中性粒细胞外捕网的影响

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H2S是一种广泛存在与自然界中的无色的有臭鸡蛋气味的易燃且有毒的气体。它可由多种方式产生。随着经济和社会发展,人们越来越关注食品安全与自身健康的关系,进而注意到畜禽饲养过程中的生活环境问题。H2S作为一种畜禽舍常见的污染物已经严重危害畜禽产品安全,危害人们健康。H2S暴露会刺激呼吸系统,引起咳嗽、炎症,还可引起中性粒细胞的损伤,导致机体的免疫功能障碍。2004年,中性粒细胞外捕网(NETs)这种新的中性粒细胞免疫应答机制被发现,它是机体发挥免疫功能的方式之一。NETs是一种发散性的网状结构,它由DNA、组蛋白、髓过氧化物酶(MPO)、中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、等构成。H2S是一种常见的外源性刺激物,但H2S暴露是否会通过TOLL样受体及PI3K/AKT通路抑制NETs的形成尚未有明确报道。H2S是畜禽舍空气中的主要污染物之一,H2S可对畜禽机体健康产生极大危害,为了探究H2S在畜禽舍中的污染程度,我们在东北地区某市筛选选取了一个养鸡场的10改为鸡舍,根据《环境空气质量标准》等畜禽舍有害气体含量相关规定,并通过H2S检测仪对鸡舍不同高度和位置H2S含量进行了检测。同时,为进一步研究H2S对鸡外周血中性粒细胞外捕网(NETs)的影响。我们选用了200只肉雏鸡在不同浓度H2S暴露的条件下进行饲养。将200只肉雏鸡平均分成两组,一组饲养在不通入H2S的正常环境中,其中H2S浓度为0.38 mg/m3,该组为国标组(N组),另一组在鸡舍中通入H2S,使鸡舍内H2S浓度保持在大于等于10 mg/m3,该组为H2S组(HS组)。两组鸡均供给相同的食水,且两组鸡能自由采食采水,饲喂时间为28天。饲喂到第28天时,从两组鸡中各随机挑选10只,采集血液,并通过中性粒细胞分离试剂盒提取血液中的中性粒细胞,并用PMA进行刺激产生NETs,并通过扫描电子显微镜观察和荧光显微镜观察,观察NETs的结构及形态学变化,通过荧光定量PCR(q RT-PCR)检测TOLL样受体中TIR4、TIR2以及PI3K、AKT、MPO、NOX2的表达,通过Werstern blot检测蛋白MPO、NE、AKT、PI3K的表达,荧光染色检测呼吸爆发时活性氧水平,以期阐明H2S暴露对鸡外周血NETs的影响。试验结果表明:(1)从我们对黑龙江省某市不同位置的10个鸡舍H2S含量和浓度的测定结果上来看,鸡舍中H2S浓度存在超标现象,H2S浓度总体超标率率为30%,其中超标浓度的最大值为35.69mg/m3。(2)通过扫描电镜观察,荧光显微镜观察,WB等试验的结果中发现,在H2S暴露的条件下,PMA诱导的NETs的产生量N+PMA组高于HS+PMA组,且与N+PMA组相比,HS+PMA组的TLR4、TLR2、PI3K、AKT、NOX2、MPO的m RNA表达量降低。综上所述,该市存在鸡舍H2S超标的情况。而动物试验表明H2S可以通过TOLL样受体通路,降低MPO的产生,抑制NETs的生成。本次试验阐明了H2S对NETs的作用机制,为家禽饲养中H2S的调控提供数据基础。
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