猪附红细胞体病(Eperythrozoon)是由猪附红细胞体寄生于猪红细胞的表面、血浆及骨髓内,以贫血、黄疸、发热等为主要临床特征的人畜共患传染病。目前对该病的研究尚不深入,可供研究的基因片段少,极大的制约了附红细胞体病的研究进展。为筛选出猪附红细胞体特异性基因,本试验初步构建猪附红细胞体基因组DNA文库,以期为附红细胞体病深入研究奠定基础。以分离的猪附红细胞体为试验材料,提取基因组DNA,选择限制性核酸内切酶Sau3A I切割DNA,根据少量酶切的结果确定最适酶切条件,回收500-2000bp的DNA片段,与经BamH I完全酶切、碱性磷酸酶(CIAP)处理后的pUC18载体连接,转化至大肠杆菌DH 5α感受态细胞,经Amp+抗性及蓝白斑法筛选重组质粒,初步构建猪附红细胞体基因组文库。结果表明,经筛选Sau3A I的最适酶切浓度为0.063U/μg DNA,不完全酶切的最适反应时间为30 min。构建的猪附红细胞体基因组文库容量含1.2×104个重组体数,覆盖率约为猪附红细胞体基因组的3倍。随机提取重组质粒,进行双酶切鉴定、序列测定及生物信息学分析。结果表明,经大量测序初步获得1个新基因片段,序列总长度为825 bp,暂命名为"E. suis-JL1",该序列最长ORF识别大小为243 bp,编码81个氨基酸,预测分析该蛋白的抗原指数较高。根据E.suis-JL1序列设计引物,建立PCR诊断方法。对该方法的最佳反应条件进行了筛选,并尽兴了特异性、敏感性及临床样本检测试验。结果表明,建立的PCR方法能扩增出猪附红细胞体基因组DNA片段,而扩增不出沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌、链球菌及猪健康血液基因组DNA,具有较好的特异性；该方法能检测到最低DNA量为68.0 pg/μL;临床样本检测结果表明,该方法的阳性检出率较高达80%,与猪附红细胞体16SrRNA序列PCR方法的阳性符合率为100%。