大血藤为木通科植物大血藤Sargentodoxa cuneata(Oliv.)Rehd.et Wils.的干燥藤茎。大血藤化学成分丰富，主要为酚类、蒽醌、黄酮类、皂苷类等化合物。现代研究发现，其主要药理活性有抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗菌等。课题组前期研究发现大血藤能有效抑制炎性骨破坏。本研究在前期课题组研究的基础上，建立大血藤不同浓度乙醇提取物指纹图谱及大血藤总酚指纹图谱，联合大血藤总酚指纹图谱信息与大血藤总酚体外抗炎性骨破坏活性药效指标，分析大血藤总酚各主要色谱峰对炎性骨破坏的药效贡献大小，旨在为大血藤质量控制和大血藤抗炎性骨破坏药效物质基础提供依据。
　　本研究采用不同产地12批次的大血藤，根据前期课题提取工艺，建立大血藤80%乙醇提取物HPLC指纹图谱，研究建立大血藤80%乙醇提取物指纹图谱检测条件，通过对检测波长、柱温、流量、进样量、流动相类型和梯度比例的筛选，确定大血藤80%乙醇提取物指纹图谱检测条件为：使用WondaCract ODS-2C18色谱柱，以乙腈和0.4%磷酸水为流动相，梯度洗脱，DAD吸收波长为280nm，柱温30℃，流速0.8mL/min，进样量15μL；根据所建立的大血藤80%乙醇提取物HPLC指纹图谱方法，进行方法学考察，结果表明大血藤80%乙醇提取物HPLC指纹图谱方法的精密性、稳定性、重复性良好。在同一色谱检测条件下，建立不同提取工艺大血藤60%乙醇提取物HPLC指纹图谱，通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版），分别进行12批次大血藤80%乙醇提取物和大血藤60%乙醇提取物相似度分析，大血藤80%乙醇提取物DAD图谱相似度范围在0.949~0.997，平均值为0.983，大血藤60%乙醇提取物DAD图谱相似度范围在0.962~0.989，平均值为0.982。结果表明，不同工艺提取下的大血藤乙醇提取物DAD图谱基本相同，化学成分基本相同，无明显差异。同时各批次间的相似度高，也表明不同产地的大血藤化学成分大致相同，无明显差异。
　　通过SP825大孔树脂富集得到5批次大血藤总酚，研究建立大血藤总酚指纹图谱检测条件，通过对检测波长、柱温、流量、进样量、流动相类型和梯度比例的筛选，确定大血藤总酚指纹图谱检测条件为：使用WondaCract ODS-2C18色谱柱，以乙腈和0.4%磷酸水为流动相，梯度洗脱，DAD吸收波长为280nm，柱温25℃，流速1mL/min，进样量10μL；根据所建立的大血藤总酚HPLC指纹图谱方法，进行方法学考察，结果表明该方法精密性、稳定性、重复性良好。通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版），将5批次大血藤总酚DAD图谱进行相似度分析，5批次大血藤总酚DAD指纹图谱相似度范围0.803~0.955，平均值为0.929。结果表明，大血藤总酚富集工艺成熟，各批次化学成分相差不大，也进一步说明各批次大血藤总酚化学成分大致相同。
　　根据建立的大血藤总酚指纹图谱条件，对5批次大血藤总酚指纹图谱共有峰进行定性定量分析。结果表明，5批次大血藤总酚15个共有峰中，指认出8个共有峰，分别为(-)-表儿茶素、羟基酪醇、儿茶素、绿原酸、红景天苷、香草酸、原儿茶酸、原花青素B2；其中，(-)-表儿茶素在4个批次中含量最为丰富。
　　采用RANKL及LPS共同诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7，建立体外炎性骨破坏模型，测定其TRAP阳性细胞数、TRAP酶活力、骨陷窝面积、及IL-6、TNF-α炎性因子的释放量药效指标，来研究5批次大血藤总酚对炎性骨破坏的作用。结果表明，5批次大血藤总酚均能有效抑制炎性骨破坏。
　　采用偏最小二乘回归分析和灰色关联度数据处理方法结合TRAP阳性细胞数、TRAP酶活力、骨陷窝面积、及IL-6、TNF-α的释放量药效指标建立谱效关系，以分析5批次大血藤总酚指纹图谱中15个共有峰与其不同抗炎性骨破坏活性药效指标关联度。综合灰色关联度和偏最小二乘回归分析结果，得出大血藤总酚抗炎性骨破坏药效主要贡献峰为9号峰（原花青素B2）、7号峰（绿原酸）、15号峰（未知峰）、11号峰（(-)-表儿茶素）、6号峰（儿茶素）、3号峰（羟基酪醇）、8号峰（香草酸）。
　　综上所述，本研究成功建立了大血藤不同浓度乙醇提取物指纹图谱，建立了大血藤总酚抗炎性骨破坏谱效关系，有效分析了其抗炎性骨破坏活性药效成分，在一定程度上揭示了其体外抗炎性骨破坏化活性药效物质基础，为大血藤质量控制和抗炎性骨破坏的研究提供参考依据。