跨膜调节剂和钙调亲环素配体互作体（Transmembrane activator and calcium-modulating cyclophilin ligand interactor,TACI）是肿瘤坏死因子受体（Tumor necrosis factor receptor,TNFR）超家族的成员,是B细胞激活因子（B cell activation factor,BAFF）的受体之一。TACI调节免疫反应,是治疗自身免疫疾病的主要靶点之一。源自骆驼科与软骨鱼血清中的天然单域抗体具有体积小、稳定性高、抗原结合亲和力强、水溶性和易于生产表达等优点,是极具潜力的下一代生物药物。条纹斑竹鲨在福建产量较高,是我国重要的经济物种,利用该种鱼类制备单域抗体,可为其进一步开发与应用提供参考。为制备靶向TACI的鲨鱼单域抗体,以人c DNA为模板经PCR扩增得到人源TACI胞外域编码区片段,其基因片段大小为126 bp,与酶切后V29H载体相连接构建原核表达载体。将TACI-V29H原核表达菌株在16°C下诱导16 h获得可溶性表达的目的蛋白,经过镍柱纯化,获得分子量约为8 k Da重组TACI蛋白,对其进行质谱鉴定,结果与目的蛋白序列覆盖率为85.7%。将重组TACI蛋白作为抗原,经三次胸鳍皮下注射与两次尾静脉注射免疫条纹斑竹鲨。在免疫周期结束后,从鲨鱼尾静脉采血分离外周血淋巴细胞进行总RNA提取,反转录成c DNA,以c DNA作为模板克隆得到大小为360 bp的鲨鱼抗体可变区,与p R2噬菌粒连接后建立库容大小为2.2×10~6CFU噬菌体文库。接着,对噬菌体文库进行淘选,进行单克隆噬菌体ELISA鉴定。将获得的阳性单克隆噬菌体进行测序分析,得到两条不同的靶向TACI鲨源单抗的可变区序列。以阳性单克隆噬菌粒质粒为模板,重新扩增出鲨鱼抗体可变区,构建真核表达载体,使用293F哺乳动物细胞表达带Fc标签的分子量约40 k Da的两个鲨源单域抗体蛋白,将其命名为T-35与T-39。最后,利用尺寸排阻色谱法鉴定两个抗体蛋白与TACI的结合活性。利用非竞争性ELISA与Blitz生物分子相互作用分析对抗体与TACI进行亲和力的初步评价,发现T-35抗体对TACI具有特异性,拟合分析得到亲和力常数KD为2.36μmol/L。综上,本文通过原核表达获得了人源TACI的胞外域蛋白,以此为抗原免疫条纹斑竹鲨鱼,制备针对TACI的两个可变区序列不同的抗体蛋白。实验发现,T-35抗体对TACI具有一定亲和力,为鲨源单域抗体的研究提供理论基础。本文以条纹斑竹鲨为对象探究鲨鱼单域抗体的筛选、制备过程及对鲨鱼单抗进行活性、亲和力等相关性质的鉴定,为后续自身免疫病的治疗用药研发、食品中农兽药残留的高灵敏度监测方法的建立等提供了理论参考。