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仔猪大肠杆菌病仍然是危害我国养猪业的重要疾病,给养猪业带来的损失不可低估,因此研究该病的快速诊断和有效防治方法具有重要意义。断奶仔猪水肿病(postweaning edema disease in piglets)是由产志贺毒素大肠杆菌(shiga toxin-producing Escherichia coli, STEC)感染引起,其初步诊断主要依赖临床检查及死后剖检,确诊则必须进行病原菌分离鉴定。本研究根据发表的志贺毒素2型变异体(shiga-toxin2e, Stx2e)基因序列设计1对引物,建立了检测STEC的PCR方法,经已知毒素类型参考菌株检测证明能够特异鉴定STEC采集疑似仔猪水肿病猪死前直肠棉拭子样品5份和死后十二指肠病料15份,接种LB肉汤,37℃培养4-6h后,用建立的PCR对培养物进行快速检测,结果19份为STEC检测阳性,表明该PCR诊断方法不仅具有简单、快速、可靠等优点,而且适合于病猪死前检测。产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli, ETEC)是仔猪腹泻(porcine diarrhea)的主要病原。本研究根据发表的大肠杆菌肠毒素STl、ST2、LT1以及耶尔森氏菌强毒力岛(high pathogenicity island, HPI)基因序列设计引物,建立了基于毒力基因检测ETEC诊断PCR方法。已知毒力型参考菌株的扩增结果表明,建立的PCR方法能特异鉴定ETEC和HPI+大肠杆菌。采集临床腹泻病仔猪肛拭子样品200份,接种LB肉汤,37～℃培养4-6h后进行PCR检测,结果显示105份(52.5%)为HPI+大肠杆菌检测阳性,15份(7.5%)为HPI+大肠杆菌和ETEC检测阳性,13份(6.5%)为ETEC检测阳性,表明该方法具有快速、准确和适合活体检测等优点。为了进一步研究HPI+大肠杆菌与仔猪腹泻的相关性,采集临床腹泻仔猪和健康仔猪肛拭子样品,接种LB肉汤,37℃培养4-6h后用上述PCR进行检测。结果显示：在110份临床腹泻仔猪肛拭子样品中,64份(58.18%)为HPI+大肠杆菌检测阳性；在54份临床健康仔猪样品中,仅24份(44.44%)为HPI+大肠杆菌检测阳性。从64份HPI+大肠杆菌检测阳性腹泻仔猪肛拭子样品中分离得600株大肠杆菌,25株经PCR鉴定为HPI+大肠杆菌,其中2株(8%)为F4+,4株(16%)为F6+,2株(8%)为F4+和F6+,1株(4%)为F6+LT1+ST2+。从24份HPI+大肠杆菌检测阳性临床健康仔猪肛拭子样品中分离得480株大肠杆菌,经PCR鉴定20株为HPI+大肠杆菌,其中仅1株(5%)为LT1+ST2+,未发现携带菌毛的大肠杆菌。血清学检测结果表明,0138为HPI+大肠杆菌的优势抗原型。结合先前的研究资料可以推测,HPI+大肠杆菌为仔猪腹泻的条件性致病菌。为了研制更有针对性的疫苗用于防疫,本研究从江苏某种猪场采集腹泻仔猪肛拭样品40份,经短暂液体培养后进行的PCR检测显示,62.5%的检测样品为HPI+大肠杆菌检测阳性,12.5%为HPI+大肠杆菌和ETEC检测阳性,5%为ETEC检测阳性。从中选择2个优势菌株制备双价氢氧化铝胶灭活自家疫苗,同场母猪免疫接种试验结果表明,其所产的46头仔猪的腹泻发病率为23.9%,商品化大肠杆菌三价灭活苗免疫母猪所产仔猪的腹泻发生率为28.9%,而非免疫组的仔猪腹泻发生率为55.5%。黏附抑制试验结果表明,免疫组和对照组母猪分娩后第一天的乳清抗体均能抑制K88+和987P+与猪小肠上皮细胞的黏附,第7天的乳清抗体均不能抑制K88+大肠杆菌与小肠上皮细胞的黏附,而免疫组母猪分娩后第7天的乳清抗体能明显抑制987P+大肠杆菌与猪小肠上皮细胞的黏附。