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目的验证重组腺病毒Ad-BMP-2-TNF-α-siRNA在细胞中的表达，并且观察其对钛颗粒诱导小鼠RAW264.7细胞分化为破骨细胞及诱导小鼠MC3T3-E1细胞分化为成骨细胞的影响。方法将重组腺病毒Ad-BMP-2-TNF-α-siRNA分别转染RAW264.7细胞和小鼠MC3T3-E1细胞。通过实时定量PCR和Western blot检测TNF-α和BMP-2的表达。将重组腺病毒转染和未转染小鼠RAW264.7细胞培养在不同的培养基中共分为5组：空白组（RAW24.7组）、对照组1（钛颗粒+RAW264.7组）、对照组2（RANKL+RAW264.7组）、对照组3（钛颗粒+RANKL+RAW264.7组）、实验组（重组腺病毒+钛颗粒+RANKL+RAW264.7组）。通过实时定量PCR检测破骨细胞特定标志（TRAP），并通过TRAP染色检测破骨细胞的生成。利用破骨细胞培养板检测蚀骨面积。讲不同的条件培养基培养小鼠MC3T3-E1细胞，通过实时定量PCR检测RANKL和IL-6的表达。将重组腺病毒转染和未转染小鼠MC3T3-E1细胞分别培养在完全培养基中，通过碱性磷酸酶试剂盒检测碱性磷酸酶。我们也将重组腺病毒转染和未转染小鼠MC3T3-E1细胞分别培养在不同的条件培养基中共分为:对照组1（CM）、对照组2（Ti CM）、实验组（Ti-ad CM）。通过碱性磷酸酶试剂盒检测碱性磷酸酶。结果1.重组腺病毒Ad-BMP-2-TNF-α-siRNA可下调钛颗粒诱导小鼠RAW264.7细胞TNF-α的表达。在RANKL的存在下重组腺病毒Ad-BMP-2-TNF-α-siRNA可抑制钛颗粒诱导破骨细胞的生成及骨吸收。通过重组腺病毒Ad-BMP-2-TNF-α-siRNA下调TNF-α可减少小鼠MC3T3-E1表达RANKL和IL-6。2.重组腺病毒Ad-BMP-2-TNF-α-siRNA在小鼠MC3T3-E1细胞中高表达BMP-2，同时可促进小鼠MC3T3-E1细胞分化为成骨细胞。3.TiCM可抑制重组腺病毒Ad-BMP-2-TNF-α-siRNA诱导小鼠MC3T3-E1细胞的分化。相比较Ti CM，将小鼠MC3T3-E1细胞培养在Ti-ad CM，重组腺病毒Ad-BMP-2-TNF-α-siRNA可诱导小鼠MC3T3-E1的分化。结论1.我们前期构建的重组腺病毒（Ad-BMP-2-TNF-α-SiRNA）在细胞水平上成功的表达。2.TNF-α可促进破骨细胞的分化及骨吸收，通过重组腺病毒（Ad-BMP-2-TNF-α-SiRNA）下调钛颗粒诱导小鼠RAW264.7细胞TNF-α的表达可抑制钛颗粒诱导小鼠破骨细胞的分化及骨吸收。3.钛颗粒诱导小鼠RAW264.7细胞释放的TNF-α可抑制重组腺病毒（Ad-BMP-2-TNF-α-SiRNA）诱导成骨细胞的分化。通过重组腺病毒Ad-BMP-2-TNF-α-SiRNA）下调钛颗粒诱导小鼠RAW264.7细胞释放的TNF-α诱导重组腺病毒（Ad-BMP-2-TNF-α-SiRNA）诱导成骨细胞的分化。4.重组腺病毒（Ad-BMP-2-TNF-α-SiRNA）在细胞水平上成功的表达。并且抑制破骨细胞的生成，同时促进成骨细胞的分化。这将为动物体内研究重组腺病毒（Ad-BMP-2-TNF-α-SiRNA）抑制钛颗粒诱导小鼠假体周围骨溶解提供了实验基础。