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以本实验室分离保存的PRV SA强毒株，根据GenBank中伪狂犬病病毒全基因组序列设计了9对引物，扩增出目的基因，并将目的基因分别与T载体连接转化，挑取阳性菌落摇菌。分别进行PCR、单酶切和双酶切三种方法对阳性克隆进行了鉴定。成功克隆目的基因gI、gE、gD、gG、28k基因。对所得序列进行Blastn分析，并递交到DDBJ/EMBL/GenBank数据库中，登录号分别为AB440240（gG）、AB440243（gE）、AB440295（gI）和AB44024（Tk）。针对gI、gE、28K、TK四个基因序列特异性位点，利用5条引物对强毒株SA株、gI-/gE-/PRV SA双基因缺失株和Bartha K61疫苗株进行了扩增，得到2061bp、1323bp、801bp和963bp特异性目的条带。Bartha K61疫苗株基因组检测最小浓度为136pg/μL。建立了针对野毒和两种疫苗株的PCR鉴别诊断方法。经测序得到gI-/gE-/PRV SA双基因缺失株gI-/gE-序列，GenBank登录号为GU262988.1，强毒株SA株TK基因GenBank登录号为AB44024。明确了gI-/gE-/PRV SA双基因缺失株（缺失gI和gE部分序列共计738bp）和PRV BarthaK61疫苗株(部分gI基因，全部的gE和US9基因和部分US2基因共计3489bp)确切位点。建立了SYBR Green I实时定量PCR方法检测伪狂犬病毒gE基因缺失毒株。灵敏度比传统PCR方法的灵敏度高1000倍，前者可达1.75个拷贝/μL，后者为1.75×103个拷贝/μL。该方法可检测出PRV，不与PCV2、PPV、CSFV、PRRSV病毒发生交叉反应。利用gE基因建立的荧光定量方法对两株野毒株、我国疫苗市场中的6种伪狂犬病活疫苗进行了检测，结果符合病毒遗传背景。对山东区域分离伪狂犬阳性病料进行检测，发现2株gE基因阳性，测序分析，发现gE的抗原位点部分碱基突变。建立了gE-ELISA检测方法的建立；检测由山东各地送检的不同猪场的240份疑似PRV感染血清样本，gE-PRV抗体检测阳性率27%，IDEXX HerdChekELISA Kit检测阳性率25.8％，阳性符合率95.19%。建立了PRV gD-ELISA检测方法，确定了最佳反应条件和判定标准；检测了来自山东、河南、河北等地的306份血清样本，检出阳性258份，阴性58份，血清抗体阳性率为84.3%。