目的论文选取与口腔鳞状细胞癌（OSCC）密切相关的蛋白标志物（PTM）为目标物,以PTM电化学免疫传感器面临的灵敏度较低、构型单一、固载效果差、检测复杂等问题为切入点,从生物元件固定化活性界面、信号标记物以及免疫检测模式等方面着手,建立系列灵敏度、稳定性和选择性三高的PTM电化学免疫传感新方法,为生物样本中活性分子识别及定量检测提供高效、精密、准确的方法学基础,为痕量标志物检测提供新思路。方法论文设计采用机械合金化法（MA）将电致化学发光（ECL）活性物掺杂多元金属材料制备光学多元金属纳米材料（OMMN）,经场发射扫描电镜（FESEM）、倒置荧光显微镜（IFM）、X-射线衍射（XRD）进行微观形貌表征和元素分析;对ECL和电化学性能进行比对研究,遴选光电行为优良的光学二元金属掺钌（Bi-Ru）、三元金属掺钌（Tri-Ru）和二元金属掺鲁米诺（Bi-Lu）的系列OMMN,并将其作为检测抗体标记物。分别以磁性氧化石墨烯（MGO）、金纳米颗粒（Au NPs）/磁性还原氧化石墨烯（Mr GO）（Au Mr GO）和氧化石墨烯/聚L-半胱氨酸/金包四氧化三铁（GO/PL-Cys/MAu/MGCE）构建系列功能磁性界面固载免疫分子,经抗原-抗体特异性结合,分别对单一PTM P16蛋白(Pp16)、c-Myc蛋白(AGc-Myc);及呈正反馈双PTM AGc-Myc和蛋白磷酸酶2A抑制剂（CIP2A）进行识别传感检测。通过FESEM、透射电子显微镜（TEM）、傅里叶变换红外光谱（FTIR）等对系列修饰电极进行微观形貌表征,使用循环伏安法（CV）、电化学阻抗谱（EIS）对传感器的构建过程进行电化学监测,利用ECL、差分脉冲伏安法（DPV）实现对目标物的灵敏检测,经方法学研究和可行性验证对三种传感器的分析性能进行系统研究。结果三种电化学免疫传感器的定量检测范围分别是0.1 ng/L～0.1μg/L、10pg/L～0.1μg/L以及5 pg/L～5 ng/L和50 pg/L～50 ng/L,检出限分别为0.5 ng/L、5 pg/L以及2.5 pg/L和25 pg/L。经系统方法学研究和可行性验证证实三种传感体系有较好的稳定性、重现性和选择性,并成功应用于加标血液、唾液样品的检测,回收率均在96.0～110.0%之间,RSD<5.90%。结论经MA制备的OMMN具有优良的ECL和电化学性能,作为信号标签可广泛应用于传感检测系统。系列功能磁性电极作为固载免疫分子的活性界面集分离、富集和检测于一体,在较便捷的基础上实现了检测信号的多重放大,达到了高灵敏检测OSCC相关PTM的目的,为痕量单一和多标志物的电化学检测提供了可能,也为其它TM的电化学免疫传感检测提供新思路。其在多种加标生物样品的PTM检测中有满意的回收率,证实所构建的系列电学免疫传感器在实际检测中有良好的应用潜能。