【摘 要】
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目的:研究九龙藤总黄酮对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其分子机制。方法:选择大鼠H9c2心肌细胞,建立缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤模型（缺氧6小时,复氧12小时）,模拟体内缺氧/复氧损伤发生发展过程;以双荧光素酶报告基因实验检测miR-30a和Beclin1之间是否存在互作关系;Western Blotting检测ATG5、Beclin1、LC3II/I、P62等自噬相关因子和MAPK信号通路
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目的:研究九龙藤总黄酮对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其分子机制。方法:选择大鼠H9c2心肌细胞,建立缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤模型（缺氧6小时,复氧12小时）,模拟体内缺氧/复氧损伤发生发展过程;以双荧光素酶报告基因实验检测miR-30a和Beclin1之间是否存在互作关系;Western Blotting检测ATG5、Beclin1、LC3II/I、P62等自噬相关因子和MAPK信号通路相关靶点P38、ERK、JNK蛋白表达及其磷酸化水平;FQ-PCR法检测miR-30a、ATG5、Beclin1、P38、ERK以及JNK基因表达水平;细胞免疫荧光法检测自噬小体相对数量。结果:1.双荧光素酶报告基因实验结果显示:miR-30a和Beclin1之间存在互作关系（P＜0.01）。2.九龙藤总黄酮通过miR-30a/Beclin1信号通路影响自噬抗心肌细胞缺氧/复氧损伤:与模型组相比,九龙藤总黄酮预处理后下调ATG5、Beclin1、LC3II/I蛋白和ATG5、Beclin1基因表达水平,上调P62蛋白和miR-30a表达水平,减少自噬小体相对数量（P＜0.05或P＜0.01）。上调miR-30a后再给与九龙藤总黄酮预处理,H/R心肌细胞的ATG5、Beclin1、LC3II/I蛋白,ATG5、Beclin1基因表达和自噬体相对数量进一步减少,P62蛋白和miR-30a表达进一步增加（P＜0.05或P＜0.01 vs.H/R+BCF）;而下调miR-30a则部分逆转九龙藤总黄酮的上述作用（P＜0.05或P＜0.01 vs.H/R+BCF）。3.九龙藤总黄酮通过MAPK信号通路抑制自噬抗心肌细胞缺氧/复氧损伤:与模型组相比,九龙藤总黄酮预处理组下调ATG5、Beclin1、LC3II/I、p-P38、p-ERK、p-JNK蛋白以及ATG5、Beclin1、P38、ERK、JNK基因表达水平,上调P62蛋白表达,减少自噬小体相对数量（P＜0.05或P＜0.01）。与MAPK抑制剂相比,九龙藤总黄酮对上述指标的影响无统计学差异（P＞0.05）。结论:九龙藤总黄酮预处理可减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤,其机制可能与介导miR-30a/Beclin1和MAPK信号通路,抑制自噬相关。
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