姜黄素下调p38MAPK通路缓解小鼠神经病理性疼痛

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目的:本研究旨在探讨姜黄素(Curcumin,Cur)缓解神经病理性疼痛的可能作用机制。方法:选用6-8周龄,体重20±2 g的C57BL/6雄性小鼠作为实验小鼠,采用坐骨神经选择性结扎法(Spared nerve injury,SNI)建立小鼠神经病理性疼痛模型,观察腹腔注射不同浓度的Cur对小鼠行为学的影响。第一部分:(1)将30只小鼠随机分为5组(n=6),sham组、SNI 1d组、SNI 3d组、SNI 7d组、SNI 14d组,通过行为学测定指标-机械痛域值(Paw withdrawal threshold,PWT)判断模型是否成功。模型成功后,在预设时间点(1d、3d、7d、14d)测定其PWT,然后处死实验动物并留取L4-6段脊髓组织,通过蛋白免疫印迹(Western blot)观察炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)及p-p38在小鼠脊髓组织中的表达及随时间变化的情况;通过免疫荧光观测p-p38在小鼠脊髓组织中的表达情况。(2)将30只小鼠随机分为sham组、SNI+DMSO组、SNI+低剂量Cur(50 mg/kg)组、SNI+中等剂量Cur(100mg/kg)组、SNI+高剂量Cur(200 mg/kg)组,共5组(n=6);sham组不做任何干预,空载组腹腔注射相等体积的DMSO,实验组每天腹腔注射不同剂量的Cur(50、100、200)mg/kg,通过PWT判断模型是否成功,模型成功后通过PWT观察不同浓度的Cur对小鼠神经病理性疼痛行为学的影响,第3d处死实验动物并提取L4-6节段脊髓组织,通过Western blot观测不同浓度的Cur对小鼠脊髓脊髓组织中炎症因子及p-p38的影响,运用免疫荧光观测p-p38在小鼠脊髓背角的表达。第二部分:观察鞘内注射p38激活剂(U-46619)后,Cur对小鼠神经病理性疼痛行为学的影响,将24只小鼠随机分为sham组、SNI+DMSO组、SNI+Cur(100 mg/kg)组、SNI+U-46619+Cur(100 mg/kg)组,共4组(n=6),运用Western blot和免疫荧光观察p-p38在小鼠脊髓组织中的表达,通过Western blot观察炎症因子在小鼠脊髓组织中的表达情况,运用酶联免疫吸附测定法(ELISA)来检测炎症因子(IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α)在小鼠脊髓组织及血清中的表达,通过免疫荧光来观察鞘内注射p38激活剂后,p-p38在小鼠脊髓背角的表达情况。结果:1行为学结果:(1)各组小鼠术前PWT无明显差异,差异无统计学意义(P>0.05);较sham组而言,SNI术后1d的模型小鼠PWT明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);(2)术后第3d,SNI+中等剂量Cur(100 mg/kg)组的小鼠PWT较单纯SNI组而言有明显的升高,差异有统计学意义(P<0.001);(3)使用p38激活剂(U-46619)组的小鼠PWT较SNI+中等剂量Cur(100 mg/kg)组而言其PWT显降低,差异有统计学意义(P<0.001)。2蛋白印迹检测结果:(1)术后第3d,与sham组相比,SNI组L4-6节段脊髓组织中的炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)及p-p38表达最高,差异有统计学意义(P<0.05);(2)与SNI组相比,SNI+中等剂量Cur(100 mg/kg)组L4-6节段脊髓组织中的炎症因子及p-p38表达降低,差异有统计学意义(P<0.01);(3)与SNI+Cur(100 mg/kg)组相比,使用p38激活剂(U-46619)组在小鼠L4-6节段脊髓组织中炎症因子及p-p38表达升高明显,差异有统计学意义(P<0.01)。3免疫荧光检测结果:(1)与sham组相比,SNI组p-p38在L4-6节段脊髓背角的表达明显增加;(2)与SNI组相比,SNI+中等剂量Cur(100mg/kg)组中p-p38在L4-6节段脊髓背角的表达量下降明显;(3)与SNI+中等剂量Cur(100 mg/kg)相比,使用p38激活剂(U-46619)组的p-p38在L4-6节段脊髓背角的表达量有明显的回升。4酶联免疫吸附实验检测结果:炎症因子(IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α)的表达情况,与sham组相比,SNI组表达明显增高,差异有统计学意义(P<0.01);与SNI组相比,SNI+中等剂量Cur(100 mg/kg)组的表达降低明显,差异有统计学意义(P<0.01);与SNI+中等剂量Cur(100 mg/kg)组相比,使用p38激活剂(U-46619)组表达升高显著,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1 SNI可以诱导小鼠神经病理性疼痛的形成;2不同浓度的姜黄素对神经病理性疼痛均具有镇痛作用,其中以(100 mg/kg)的姜黄素效果最佳;3姜黄素通过下调p38MAPK通路缓解小鼠神经病理性疼痛。
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