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背景有研究显示,侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)早期,病人体内与侵袭性感染有关的优势抗原Ig G抗体水平升高,可能适用于IC的早期诊断。本研究组前期工作也发现,80%以上的IC病人可检出与侵袭性感染相关的几种优势抗原(如烯醇化酶,等)Ig G抗体水平升高,其中50%以上的病人血清抗体升高甚至早于念珠菌血培养阳性结果。念珠菌是常见的条件致病菌,经常在人体寄生或定植。人体免疫系统有很多机会受到各种念珠菌抗原的刺激而产生免疫应答。因此推测,侵袭性念珠菌感染时优势抗原的Ig G抗体水平早期快速升高,可能是正常状态下念珠菌定植引起的回忆性体液免疫应答所致,但尚无实验证据。目的用动物实验证明经历念珠菌定植或寄生的动物,在遭受侵袭性感染后,Ig G抗体水平早期快速升高,是由于特异性体液免疫记忆细胞短时大量增殖所致。并测定侵袭性念珠菌病病人血清三类抗体水平,对预测结果进一步验证。方法模拟自然情况下侵袭性念珠菌感染的情形,先建立小鼠口腔念珠菌定植模型,再经腹腔注射念珠菌孢子造成侵袭性感染。检测免疫正常和免疫抑制状态的感染小鼠脾脏白念珠菌烯醇化酶(Enolase,Eno)特异性记忆B细胞(memory B cell,Bm)的数量以及外周血Ig G、Ig M和Ig A类抗体水平,并与未经念珠菌定植的侵袭性感染小鼠的相应指标进行比较。用ELISA方法检测患者血清中Eno-Ig G、Ig M和Ig A抗体水平,并对三种类型抗体水平进行比较。结果(1)成功建立了检测Eno抗原特异性Bm的ELISPOT方法并对其进行优化。结果显示,阳性对照孔和Eno特异抗原孔的最佳细胞数分别为10,000/孔和500,000/孔,生物素化Eno的最适使用浓度为2μg/m L。(2)经历念珠菌定植的小鼠,不论是否接受免疫抑制处理,遭受侵袭性感染第7天,脾脏Eno抗原特异性Bm频数均显著多于未经历念珠菌定植的小鼠和仅经历定植而未遭受侵袭性感染的小鼠(P<0.01)。(3)受到侵袭性感染第7天,经历念珠菌定植小鼠血清Eno-Ig G抗体水平显著升高。(4)Eno-Ig G抗体水平与抗原特异性Bm频数呈正相关(r=0.737,P<0.01)。(5)ELISA方法检测IC患者血清三种类型抗体结果显示,Eno-Ig G抗体阳性率显著高于Eno-Ig A抗体和Eno-Ig M抗体阳性率,差异有统计学意义(χ2=29.851;P<0.01;χ2=21.744;P<0.01)。结论1.经历念珠菌定植的动物,在受到侵袭性感染后特异性记忆细胞短时大量增殖导致优势抗原Eno的Ig G抗体水平快速升高。2.仅有念珠菌定植而无侵袭性感染的小鼠,优势抗原Eno的Ig G抗体水平无明显变化。3.IC病人侵袭性感染早期即可在血清中检测到抗Eno抗体升高,以Ig G类抗体为主。4.优势抗原Eno-Ig G抗体测定,可用于侵袭性念珠菌病的早期血清学诊断。