【摘 要】
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目的:探讨蛋白磷酸酶2A催化亚基c（PP2Ac）蛋白在人肝细胞癌（HCC）组织中的表达;探讨急慢性氧化应激条件下肝癌细胞中蛋白磷酸酶2A催化亚基（PP2Ac）对肝癌细胞Huh-7和SMMC-7721增殖的影响及其相关调控蛋白的表达水平。方法:1.共选取广西医科大学附属肿瘤医院2017年7月至2019年7月期间75例患者术后病理诊断为HCC的新鲜肿瘤标本。采用免疫组化实验测定PP2Ac在肝细胞癌组织
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目的:探讨蛋白磷酸酶2A催化亚基c（PP2Ac）蛋白在人肝细胞癌（HCC）组织中的表达;探讨急慢性氧化应激条件下肝癌细胞中蛋白磷酸酶2A催化亚基（PP2Ac）对肝癌细胞Huh-7和SMMC-7721增殖的影响及其相关调控蛋白的表达水平。方法:1.共选取广西医科大学附属肿瘤医院2017年7月至2019年7月期间75例患者术后病理诊断为HCC的新鲜肿瘤标本。采用免疫组化实验测定PP2Ac在肝细胞癌组织和癌旁组织的表达情况。2.选取不同浓度的H2O2（0、50、100、200、400、800μmol/L）与人肝癌细胞（Huh-7细胞和SMMC-7721细胞）共培养2h、4h、6h和8h后,选取不同浓度的AFB1（0、1.25、2.5、5、10、20、40μmol/L）与人肝癌细胞（Huh-7细胞和SMMC-7721细胞）共培养24h、48 h和72h后,采用显微镜观察细胞形态变化;CCK-8法检测细胞增殖活性,采用Western Blot实验检测去甲基化PP2Ac（Dem-PP2Ac）蛋白、甲基化PP2Ac（Me-PP2Ac）蛋白和PP2Ac蛋白及其调控蛋白亮氨酸甲基转移酶1（LCMT-1）、蛋白磷酸酶甲基酯酶（PPME-1）的表达情况。结果:1.免疫组化结果显示PP2Ac在人HCC组织中以高表达为主,并且主要表达部位位于细胞质。2.在不同浓度H2O2急性刺激的条件下,100μmol/L及以上浓度的过氧化氢作用的Huh-7和SMMC-7721细胞活性逐渐降低,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.050）。在200μmol/L H2O2与人肝癌细胞共培养2h后成功构建急性肝癌细胞损伤模型。3.在不同浓度AFB1慢性刺激的条件,2.5μmol/L及以上浓度细胞活性逐渐降低,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。在10μmol/L、5μmol/L AFB1与人肝癌细胞共培养24h后成功构建慢性肝癌细胞损伤模型。4.用200μmol/L H2O2分别刺激Huh-7细胞,SMMC-7721细胞2h后PP2Ac、Dem-PP2Ac和PPME-1蛋白表达水平与对照组相比升高,LCMT-1、Me-PP2Ac蛋白表达水平与对照组相比表达降低,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。5.用10μmol/L AFB1刺激Huh-7细胞24h后,PP2Ac、Dem-PP2Ac和PPME-1蛋白表达水平与对照组相比升高,LCMT-1、Me-PP2Ac蛋白表达水平与对照组相比降低,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）;用5μmol/L AFB1刺激SMMC-7721细胞24h后PP2Ac、Dem-PP2Ac和PPME-1蛋白表达水平与对照组相比升高,LCMT-1、Me-PP2Ac蛋白表达水平与对照组相比降低,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:1.在75例人肝细胞癌标本的癌组织与癌旁组织中,PP2Ac蛋白在人HCC组织中以高表达为主,并且主要表达在细胞质。2.H2O2和AFB1均对人肝癌细胞（Huh-7、SMMC-7721）的杀伤具有明显的时间和浓度依赖性。在200μmol/L H2O2与人肝癌细胞（Huh-7、SMMC-7721）共培养2h后成功构建急性肝癌细胞损伤模型。在10μmol/L、5μmol/L AFB1分别与人肝癌细胞Huh-7、SMMC-7721细胞共培养24h后成功构建慢性肝癌细胞损伤模型。3.在H2O2和AFB1分别刺激人肝癌细胞（Huh-7、SMMC-7721）的急慢性氧化应激模型中,PP2Ac蛋白、去甲基化PP2Ac蛋白和PPME-1蛋白高表达;LCMT1蛋白、甲基化PP2Ac蛋白表达降低;提示LCMT-1、PPME-1可能与PP2Ac的甲基化调控有关。
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