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肠道是重要的消化器官,同时也是机体最大的免疫器官,肠道屏障的完整与免疫功能的健全是机体健康的保障。枯草芽孢杆菌是一种有益菌,目前的研究主要集中在其促生长方面,虽也有关于其在维持肠道屏障与抑制炎症方面的报道,但枯草芽孢杆菌影响肠道屏障与免疫的机制尚不清楚。枯草芽孢杆菌的剂量和肉鸡的日龄是否会对枯草芽孢杆菌的效果造成影响也未见报道。本研究通过在日粮中添加不同剂量的枯草芽孢杆菌以及在不同时间采样,研究枯草芽孢杆菌剂量对不同日龄白羽肉鸡肠道黏膜屏障和炎症的影响及其机制。本研究选择白羽肉鸡作为试验动物,60000只肉鸡随机分为3个组,分别为基础日粮（基础日粮组,Basic Diet Group,BD）,添加1‰（低剂量组,Low Dose Group,LD）或1.5‰（高剂量组,High Dose Group,HD）枯草芽孢杆菌的试验组,每组8个重复。分别于20 d与40 d从每个重复中随机选取一只,采集血液样本进行血常规检测;采取肠道和脾脏组织制成石蜡切片,观察形态学结构;将肠道组织制成电镜样品,观察绒毛表面超微结构;采集肠道组织通过RT-q PCR检测肠道紧密连接蛋白、Toll样受体（tolllike receptors,TLRs）通路与胆汁酸通路关键基因表达;Western blot检测核因子κB（Nuclear factor kappa B,NF-κB）与法尼酯X受体（Farnesoid X receptor,FXR）蛋白表达情况;染色质免疫共沉淀（Chromatin immunoprecipitation,CHIP）检测FXR启动子区域组蛋白修饰情况。结果如下:1.对照组与试验组肠道绒毛形态完整,与对照组相比20 d和40 d十二指肠LD组绒毛长度增加（P<0.05）,40 d十二指肠、空肠HD组隐窝深度增加（P<0.05）;扫描电镜下,试验组与对照组肠绒毛表面杯状细胞与柱状上皮细胞形态正常,没有差异。q PCR结果显示,试验组紧密连接蛋白基因表达显著降低（P<0.05）,且40 d试验组与对照组有差异的紧密连接蛋白比20 d更多,但紧密连接蛋白基因的变化没有剂量依赖性。2.血常规检测结果显示炎性细胞数量没有差异;脾脏HE染色结果未发现白髓面积有显著差异。q PCR结果显示20 d十二指肠HD组TLRs m RNA水平显著低于LD组（P<0.05）,试验组骨髓分化初级反应蛋白MYD88（Myeloid differentiation primary response protein MYD88,MYD88）显著高于BD（P<0.05）;40 d十二指肠空肠与回肠试验组Tlr4、Tlr5显著（P<0.05）或极显著降低（P<0.01）,但不呈现剂量依赖性,空肠LD组NF-κB显著高于BD,其他肠道NF-κB、白介素1β（Interleukin-1β,IL-1β）、肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factorα,TNF-α）没有显著差异（P>0.05）;Western Blot结果显示20 d回肠NF-κB蛋白表达没有差异（P>0.05）,40 d显著降低（P<0.05）,但20 d与40 d试验组p-NF-κB与BD组相比均没有显著差异（P>0.05）。3.与对照组相比,20 d空肠HD组编码FXR的基因Nr1h4显著升高（P<0.05）;40 d十二指肠、空肠与回肠HD组Nr1h4均显著降低（P<0.05）,回肠LD组Nr1h4极显著低于BD组（P<0.01）;20 d十二指肠和空肠编码类维生素A X受体α（Retinoid X receptorα,RXRA）的基因Nr2b1极显著降低（P<0.01）,40 d十二指肠Nr2b1显著降低（P<0.05）;40 d回肠高剂量组编码根尖钠依赖性胆汁酸转运蛋白（Apical sodiumdependent bile acid transporter,ASBT）的基因Slc10a2显著降低（P<0.05）;40 d回肠LD组FXR蛋白表达显著降低（P<0.05）;FXR启动子HD组组蛋白H3乙酰化（acetylation of histone H3 protein subunit,H3Ac）水平显著降低（P<0.05）,试验组H3K4三甲基化（trimethylation of lysine 4 on histone H3 protein subunit,H3K4me3）显著降低（P<0.05）,LD组H3K9单甲基化（monomethylation of lysine 9 on histone H3 protein subunit,H3K9me）显著降低（P<0.05）,试验组H3K27三甲基化（trimethylation of lysine27 on histone H3 protein subunit,H3K27me3）水平显著低于对照组（P<0.05）。以上结果表明饲料中添加枯草芽孢杆菌会增加绒毛长度与隐窝深度,降低肠道紧密连接蛋白表达,且随肉鸡日龄增加枯草芽孢杆菌的作用更显著,血液检测结果显示试验组与对照组均没有发生炎症。q PCR结果显示试验组Tlr减少,Western Blot结果表明NF-κB蛋白表达降低,提示TLR通路受到抑制。胆汁酸通路基因Slc10a2与Nr1h4降低,40 d FXR蛋白表达降低。通过CHIP对FXR启动子区域组蛋白修饰情况进行检测,结果显示H3K4me3水平降低,因此推测枯草芽孢杆菌影响FXR启动子组蛋白修饰,使ASBT与FXR基因表达减少,FXR蛋白表达降低,抑制胆汁酸通路进而导致肠道紧密连接蛋白减少,吸收功能增强,TLR通路受到抑制;枯草芽孢杆菌的效果没有剂量依赖性,但具有时间依赖性。