论文部分内容阅读
抗逆转录病毒治疗(antiretroviral therapy,ART)使艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)从一个致死性疾病转变为目前可防可控的慢性病。但是目前的药物仅能抑制而不能根除病毒,故寻找更有效的诊疗手段一直都是研究热点,其中微小RNA(micro ribonucleic acid,miRNA)靶向治疗、CRISPR/Cas9基因编辑等基因疗法为疾病治愈提供了可能。同时,疗效的保证建立在及时诊断、规范给药的前提下。为了确认AIDS患者长期生存的可能性,我们对长期治疗的AIDS病人进行了生存随访的分析,了解疗效及依从性的情况,以期总结经验,优化策略,提升患者生活品质。故本研究从探索方法和新策略两个方面入手,力求为优化HIV治疗提供新的科学依据及综合治疗策略。研究的第一部分中,我们从基础层面找寻新治疗靶点。miRNA作为重要的宿主因子,可在人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HI V)感染的过程中与之发生复杂的相互作用,一方面细胞内许多miRNAs对HIV具有抑制作用,另一方面HIV也会反过来影响miRNA的表达,导致表达谱的改变。miRNA或可成为HIV感染的生物标志物或潜在治疗靶点。我们利用基因芯片分析HIV感染者(包括治疗者与未治疗者)与健康人群PBMC中miRNA的表达谱,发现这三组人群之间存在显著差异(P<0.05)),可相互区分。相较于健康人群,HIV感染者的 hsa-miR-423-5p 等 3 条 miRNAs 表达升高;hsa-miR-3667-5p 等 7 条 miRNAs 表现下调;hsa-miR-937在治疗者中下降,未治疗者则相对健康人上升。总体而言,miRNA在感染HIV后呈现为下调的趋势。随后,我们将筛选出的差异表达的microRNA,在扩大样本量(总计150例)后经定量PCR验证。其中,hsa-miR-191-5p在HIV患者与健康对照人群中存在显著差异(P<0.05),且两种检测方法的结果一致,即感染者中表达较正常对照显著下降。进一步在体外细胞模型验证,hsa-miR-191-5p对HIV的复制表现出了抑制作用。为探求其作用机制,我们通过生物信息学数据库与文献检索等手段对靶分子进行预测。经定量PCR和构建报告基因,发现hsa-miR-191-5p可能是通过抑制CCR1和(或)NUP50实现对HIV的抑制效应,在进一步探究潜在治疗靶点提供了科学依据。在研究的第二部分中,我们为了解目前治疗的有效性、最大程度降低其副作用、提高HIV感染者的生活质量,分析了 6位治疗30年左右并随访至今的珍贵德国病例。这些病人目前平均年龄为58.33岁,均为男性,经男男性接触感染。首次诊断时,他们的平均年龄仅为28.83岁,平均CD4+T淋巴细胞只有226.67/μL,而病毒载量平均高达1.3×105 copies/mL。除HIV感染以外,同时还伴有多种机会性感染、心血管疾病以及血糖血脂代谢异常等,已达到HIV感染晚期,即AIDS期。一经诊断,他们马上接受了相应的治疗,并坚持每3个月在医院接受一次随访。我们将每5年的随访结果汇总,整理成图表,发现经过30年左右的治疗,目前这些病人的CD4+T细胞都达到了正常水平,平均778.67/μL,病毒载量均低于检测值(<20 copies/mL),机会性感染均已治愈,其他神经系统、消化系统疾病及代谢异常等问题也得到了有效治疗。分析历年的实验室检查指标,病人的血常规指标、活化部分凝血激酶时间、淋巴细胞亚群分析以及生化指标检查结果,绝大部分都逐渐趋近或达到了正常水平,仅少数指标仍有异常。总体CD8+T细胞目前水平为 905.50/μL,HLADR 活化细胞 359.17/μL,CD4/CD8 比值为 1.17。偏高 CD8+T细胞计数以及HLADR,有所上升但仍低于正常的CD4与CD8比值(病人1除外,已达到2.8),表明了持续的免疫激活。这些患者最初均患有代谢相关疾病。治疗前的平均血糖5.83 mmol·L-1,但目前为4.97 mmol·L-1。经治疗,病人1和病人4的血脂虽有控制但尚未调整到正常水平,其余患者平均胆固醇4.5 mmol·L-1,甘油三酯1.09 mmol·L-1。在患病的过程中,几乎每个病人都有不同程度的心理疾病存在,病人出现抑郁、睡眠障碍、偏头痛等情况,医生诊断后,采用药物与心理疏导相结合的方式,目前已经明显改善。从随访过程中的检查结果以及病情记录来看,通过积极的治疗,他们的身体状况有明显好转。以上结果提示,只要病人依从性好,与医护积极沟通,及时处理并发症、继发疾病以及在当前治疗方案失败后更换合适有效的药物,即使在初次诊断已经达到了艾滋病期,患者仍可以长期生存。只要艾滋病患者尽早治疗,及时对症处理,积极随访,最终甚至能够达到与正常人无异的生存状态,实现身体和生活质量的双重提高。综上,本研究可得到以下结论:(1)HIV 感染后可引起 PBMC 中 hsa-miR-191-5p 显著下调;hsa-miR-191-5p 可以抑制HIV复制,可能是通过抑制CCR1和(或)NUP50实现,为进一步探究潜在治疗靶标提供了科学依据。(2)只要HIV感染者尽早治疗,及时对症处理,积极随访,即使已患艾滋病,仍可以长期生存,甚至能够达到与正常人无异的生存状态,实现身体和生活质量的双重提高。