【摘 要】
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研究目的:1.研究腺苷A1受体激动剂2-氯环戊腺苷(CCPA)预处理是否对新西兰兔心肌缺血再灌注损伤具有延迟性保护作用；2.用蛋白质组学方法研究CCPA预处理后24h心肌组织蛋白质表达谱的变化。3.用Western印迹法检测其中某些差异蛋白质，寻找可能参与CCPA预处理延迟性心肌保护作用的蛋白质。研究方法:实验分三部分：(1)新西兰大白兔随机分为4组：假手术组(Sham组)、I/R组、NS组和CC
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研究目的:
1.研究腺苷A1受体激动剂2-氯环戊腺苷(CCPA)预处理是否对新西兰兔心肌缺血再灌注损伤具有延迟性保护作用；
2.用蛋白质组学方法研究CCPA预处理后24h心肌组织蛋白质表达谱的变化。
3.用Western印迹法检测其中某些差异蛋白质，寻找可能参与CCPA预处理延迟性心肌保护作用的蛋白质。
研究方法:
实验分三部分：(1)新西兰大白兔随机分为4组：假手术组(Sham组)、I/R组、NS组和CCPA组。NS组用生理盐水预处理大白兔，CCPA组用100pg/kg CCPA预处理，Sham组及I/R组不给任何预处理，24h后阻断冠状动脉左前降支30min，再灌注120min，Sham组冠状动脉左前降支只套带而不阻断血流，测定心肌梗死面积和血浆心肌酶及肌钙蛋白I浓度，用光学显微镜和电子显微镜观察心肌组织与细胞的结构变化，确定CCPA预处理是否对兔心肌具有延迟性保护作用。(2)用双向凝胶电泳法分离CCPA预处理(CCPA组)和生理盐水预处理(NS组)24h 后兔的心肌组织蛋白质，图像分析后找出差异蛋白质，再用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定部分差异蛋白质。(3)根据第二部分结果，用Western印迹法检测其中某些差异蛋白质。
研究结果:
1.心电图检测显示ST段在缺血期明显抬高，再灌后恢复，说明复制模型过程中缺血和再灌完全，同时血清CK，CK-MB，cTn I浓度显著高于假手术组，说明本研究可以成功建立了新西兰兔心肌缺血再灌注损伤模型；CCPA预处理24小时后心梗面积显著小于I/R组及NS。组，血清CK,CK-MB,cTn I浓度明显低于其它各组；光镜及电镜结果显示CCPA组心肌组织细胞损伤减轻。
2.双向凝胶电泳分析结果发现表达明显差异的蛋白点有55个，其中表达明显增强(大于3倍)的有25个，表达明显降低(大于3倍)的有16个，表达不匹配(仅在CCPA处理组出现)的有14个。选取其中20个差异蛋白质点进行MALDI-TOF-MS分析，共获得了17张肽质量指纹图谱。并进一步采用Mascot与Expasy软件分析鉴定出了17个蛋白质，这些蛋白包括包括应激反应蛋白(如aB.晶状体蛋白)、代谢相关蛋白(如L-天门冬氨基酸-O甲基转移酶，鸟嘌呤结合蛋白-γ)、信号调节蛋白(如磷酯酰肌醇3激酶)、离子通道蛋白(如电压依赖性阴离子选择性通道蛋白2，接头相关蛋白复合体1)，免疫相关蛋白(HLA-B相关转录本3，MHC-ⅡDR.抗原β亚单位，免疫球蛋白重链可变区)等。
3.采用免疫印迹技术对其中的一个蛋白质点(232号)代表的αB晶体蛋白进行验证发现，αB晶体蛋白的表达在100μg/kg CCPA处理时亦明显上调。
研究结论:
1. CCPA.预处理对兔心肌具有延迟性保护作用。
2. CCPA预处理24h后心肌组织的蛋白质表达谱发生改变：从20个蛋白点中鉴定出17个蛋白质，包括应激反应蛋白(如αB-晶状体蛋白)、代谢相关蛋白(如L-天门冬氨基酸-O甲基转移酶，鸟嘌呤结合蛋白-γ)、信号调节蛋白(如磷酯酰肌醇3激酶)、离子通道蛋白(如电压依赖性阴离子选择性通道蛋白2，接头相关蛋白复合体1)，免疫相关蛋白(HLA-B相关转录本3，MHC-ⅡDR抗原β亚单位，免疫球蛋白重链可变区)等。
3．结合Western Blotting鉴定进一步确定CCPA预处理可以诱导αB-晶状体蛋白表达上调；首次发现αB-晶状体蛋白与CCPA预处理延迟性心肌保护作用有关。这为全面揭示CCPA预处理延迟相心肌保护作用的机制提供了重要信息。为临床采用腺苷A1受体激动剂CCPA防治心肌损伤奠定了基础，提供了实验依据。
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