CBX蛋白作为哺乳动物多梳抑制复合体PRC1的核心组分在干细胞干性维持和胚胎发育过程中发挥着重要的作用。哺乳动物CBX同源蛋白Cbx2敲除型小鼠出现雄性-雌性的性别逆转,类似的发育异常现象在人类Cbx2点突变的病例中也有报道。目前有一定实验证据表明CBX2可能通过调控性别决定基因Sry及Nr5a1基因的表达调控性别发育,但由于其效应显示为基因激活作用,与已知的PRC1抑制基因表达的效应不吻合,具体的调控机制目前还不明确。为了深入探究CBX2调控性别发育的机制,对Cbx2进行敲除和过表达等基因操作必不可少。而此时一种新型基因编辑系统CRISPR/Cas9应运而生,操作简便快速高效,因此本论文尝试应用了多种CRISPR/Cas9体系去进行Cbx2基因的敲除。通过建立并不断完善本实验室CRISPR/Cas9系统,得到了高效率的瞬时转染实验系统和慢病毒载体感染系统,并且构建了可诱导表达Cas9的多种细胞系,能够较为成熟简便地使用CRISPR/Cas9对人胚肾细胞HEK293T、小鼠胚胎干细胞E14TG2a和小鼠睾丸畸胎瘤细胞F9等不同细胞系进行基因编辑。目前已使用瞬时转染系统得到了纯合型和杂合型的Cbx2 KO HEK293T单克隆细胞系,并且确立了在基因测序和蛋白水平上进行了敲除效率验证的实验体系。另外,我们对收集到的一例性别发育障碍(DSD)患者病例的外周血样品中Cbx2外显子进行了扩增后测序,发现了一个点突变(L4M)。同时我们也对建立检测CBX2靶向募集特异性的报告基因实验系统进行了初步的前期摸索。本论文的工作不仅在方法学上成功建立了多种CRISPR/Cas9实验体系进行基因敲除,更重要的是所建立的相关Cbx2敲除细胞系为进一步揭示CBX2在胚胎性别决定与分化过程中的调控机制以及是否依赖PRC1发挥调控作用奠定了良好基础。