日本血吸虫SjIR<,3>基因的克隆、原核表达及其抗攻击感染免疫保护力的研究

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血吸虫病是一种分布广、危害严重的人畜共患寄生虫病。现阶段我国采取化疗为主,结合易感地带灭螺和健康教育的策略,研究疫苗作为重要的辅助手段,现已获得学界公认。血吸虫SjIR3由感染兔血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库而得到,可能成为疫苗候选分子。为此,本研究在克隆血吸虫SjIR3因后,将其亚克隆至pET-32a(+)上,经诱导获得rSjIR3,并进行动物保护试验以了解其保护效果。 根据己发表的日本血吸虫SjIR3基因序列,设计一对寡核苷酸引物,从成虫cDNA文库PCR扩增出SjIR3基因,重组到pMD18-T Simple载体上测序,通过互联网进行同源性、跨膜结构、二级结构、结构域和抗原表位分析。按常规方法收集SjIR3基因,亚克隆至pET-32a(+)载体上,转化入大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE及western-blot进行分析。动物保护试验采用20±1g昆明系小鼠分A、B、C、D四组,A、B组分别接种rSjIR3和rSjIR3+FCA佐剂,C、D为对照组分别接种PBS和FCA。按腿部肌肉注射每只小鼠50ug,免疫程序为0-2-4-6周,尾静脉采血收集血清,ELISA检测IgG水平。8周后,每只小鼠攻击40±1条尾蚴,45天后剖杀,冲虫,计数减虫率和减卵率。 通过PCR从cDNA文库扩增出900bp的片段,生物信息学分析表明该DNA与GenBank中的SjIR3(AY251481)100%的同源,为一可溶性蛋白,二级结构中a螺旋占32.11%,β转角占18.73%,无规卷曲占49.16%。该蛋白具有PS50204和SSF69572两个Domain,为泛素样蛋白激酶家族。体外重组表达的rSjIR3通过SDS-PAGE及western-blot检测,rSjIR3分子量约51kD,与预期分子量相符。动物保护试验表明rSjIR3及rSjIR3+FCA免疫小鼠,可诱导产生26.63%、34.79%、26.38%、44.09%的减虫率、减卵率。 SjIR3基因可以在pET-32a(+)中表达,重组表达蛋白rSjIR3具有良好的免疫原性,并能诱导小鼠产生部分抗攻击感染的保护力。
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