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目的:长波紫外线(UVA)可以引起皮肤发生光损伤。局部应用或食用天然化合物能防止皮肤发生光损伤。然其中相关机制尚未完全阐述。自噬是一个发生在所有真核生物中的有关细胞成分选择性降解的重要过程。矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)作为具有氧自由基吸收能力的花青素单体,对抗UVA引起的人皮肤成纤维细胞(HDFs)损伤的研究较少。本实验采用UVA照射原代HDFs建立光损伤模型,研究C3G对UVA诱导的原代HDFs损伤的改善作用,并运用自噬抑制剂3-MA干预初步探讨自噬在C3G抗光损伤中的作用,为天然化合物防治原代HDFs光损伤提供实验依据。方法:1 UVA对原代HDFs凋亡及自噬水平的影响。(1)运用酶消化法从人包皮组织提取原代HDFs。(2)实验分组为正常对照组及不同能量UVA组。(3)利用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测细胞活性;用Western blot实验检测原代HDFs凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bax以及自噬相关蛋白Atg5和LC3的表达情况;运用电镜观察自噬小体。2 C3G对UVA引起的原代HDFs损伤的保护作用观察。(1)利用MTT法检测细胞活性,确定C3G的作用浓度。(2)实验分组为:空白对照组,UVA损伤组,C3G组和C3G联合UVA干预组。(3)利用免疫荧光和流式细胞术观察和检测活性氧(ROS);流式细胞术检测细胞凋亡水平;Western blot实验检测原代HDFs凋亡相关蛋白以及自噬相关蛋白的表达情况。3自噬抑制剂3-MA对C3G对抗原代HDFs UVA损伤的影响。(1)利用MTT法检测细胞活性,确定3-MA的作用浓度。(2)实验分组为:无处理的正常对照组,UVA组,UVA+C3G组,UVA+C3G+3-MA组,C3G组和3-MA组。(3)利用免疫荧光和流式细胞术观察和检测ROS;流式细胞术检测细胞凋亡水平;Western blot实验检测原代HDFs凋亡相关蛋白的表达情况。结果:实验结果显示:1从包皮组织提取的原代细胞均表达Vimentin。运用UVA照射原代HDFs,随着UVA能量的增加,细胞活力逐渐下降,凋亡水平增加且呈UVA剂量依赖性,各照射组与对照组相比,均有统计学意义(P<0.05)。而当UVA能量为0-4J/cm~2时自噬水平增加,后随着UVA能量的增加自噬水平减少。根据MTT实验选择12J/cm~2能量的UVA照射原代HDFs作为光损伤模型。2在12J/cm~2 UVA诱导的原代HDFs光损伤模型中,C3G能明显降低细胞ROS含量,减少细胞凋亡的发生,增加抗凋亡蛋白Bcl-2与促凋亡蛋白Bax的比值,减少caspase-3的活化,增加细胞自噬蛋白Atg5和LC3的水平。3运用自噬抑制剂3-MA干预C3G对抗12J/cm~2 UVA引起的原代HDFs的损伤,与C3G干预UVA照射原代HDFs组相比,UVA+C3G+3-MA处理组ROS水平及凋亡水平明显升高,且抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax的比值明显减少(P<0.05)。结论:1从包皮组织提取的目的细胞为原代HDFs。UVA照射能明显增加原代HDFs的凋亡水平。较高能量的UVA可以减少原代HDFs的自噬水平。选择12J/cm~2 UVA照射原代HDFs作为光损伤模型。2 C3G能明显降低光损伤模型中原代HDFs的凋亡,且增加原代HDFs的自噬水平。3 C3G降低光损伤模型中原代HDFs凋亡的作用机制可能与其增加原代HDFs自噬水平有关。