【摘 要】
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心血管疾病是严重威胁人类健康的重大疾病,具有高发病率、高致残率和高死亡率等特点,发病年龄有年轻化的趋势。心肌损伤类型包括局部缺血性损伤、缺血再灌注损伤、缺氧损伤、
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心血管疾病是严重威胁人类健康的重大疾病,具有高发病率、高致残率和高死亡率等特点,发病年龄有年轻化的趋势。心肌损伤类型包括局部缺血性损伤、缺血再灌注损伤、缺氧损伤、心肌肥大、缺氧／复氧损伤、氧化应激损伤、高磷血症引起的心肌损伤、癌症患者化疗药物引起的损伤等。其中,癌症治疗的化学疗法会导致短期或者长期的心脏血管的并发症。在癌症患者化学疗法诱导的心肌毒性的药物中,蒽环类抗生素是主要的毒性药物,由此限制了它的临床应用。而心肌细胞的营养缺乏在临床上也是普遍发生的,它介导多种心脏局部缺血病理过程,比如冠心病和心力衰竭等,在此过程中会发生自噬的激活,最终心肌细胞存活或者死亡。从天然植物中寻找新型、高效的具有心肌保护作用的药物仍是药学研究的重点之一。中药作用范围广,毒副作用少,能有效地清除氧自由基抗脂质过氧化作用和调节钙离子稳定,从而保护心肌细胞损伤。青兰属植物为多年生草本植物,广泛分布于我国西北地区。其地上全草所含总黄酮静脉滴注可以有效缓解犬急性心肌缺血,缩小急性心肌梗死面积,冠脉流量明显增加。为寻找对心肌细胞有保护作用的有效成分,开发利用该植物资源,我院天然药化教研室对该植物地上全草进行了系统的化学成分研究,通过对已提取的化合物进行的药理活性研究,发现木犀草素-7-O-葡萄糖苷(Luteolin-7-O-Glucoside, LUTG)对心肌损伤有一定保护作用。前期研究表明LUTG预处理对多柔比星诱导的心脏毒性有显著的保护作用,且对多柔比星的抗肿瘤活性没有影响。但其具体的对心肌保护的作用机制尚不明确。本课题主要通过体外实验,研究LUTG对多柔比星或饥饿诱导的心肌细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机制,为开发具有我国自主知识产权的心血管药物奠定基础。LUTG对多柔比星诱导的心肌细胞损伤的保护作用：细胞形态学检测结果显示,LUTG明显抑制多柔比星诱导的H9c2心肌细胞损伤；DAPI及吖啶橙染色结果显示,LUTG逆转多柔比星诱导的H9c2心肌细胞的凋亡；JC-1荧光探针检测结果显示,LUTG逆转多柔比星诱导的H9c2心肌细胞线粒体膜电势的去极化,逆转线粒体的损伤；Western blotting结果显示,多柔比星处理组p-PTEN的表达明显下降,p-Akt, p-ERK, p-mTOR,以及p-GSK-3β的表达明显增加；而预处理LUTG (20μM),明显上调p-PTEN的表达,明显下调p-Akt, p-ERK, p-mTOR,以及p-GSK-3β的表达。LUTG对饥饿诱导的心肌细胞损伤的保护作用：MTT检测结果显示,心肌细胞的活力随饥饿时间依赖性的降低,自噬抑制剂3-MA降低正常条件及饥饿条件下心肌细胞的活力。流式和Western blotting结果显示,饥饿会抑制心肌细胞的周期和细胞周期蛋白cyclinD1和p21的表达,并抑制p-Akt, p-mTOR的表达,而上调p-ERK的表达。LUTG预处理后,MTT结果显示,LUTG (5,10,20μM)明显保护饥饿诱导的心肌细胞的损伤,而自噬抑制剂3-MA可阻断LUTG对饥饿诱导的心肌细胞损伤的保护作用。Western blotting结果显示,LUTG可增强饥饿条件下心肌细胞的自噬,并下调p-ERK的表达。结论：LUTG对多柔比星或饥饿诱导的心肌细胞损伤都有明显的保护作用,可能通过调节Akt/mTOR及ERK信号通路而发挥心肌保护作用。
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