【摘 要】
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沙棘（Hippophae rhamnoides）是具有重要生态功能和经济开发价值的优良树种。近几十年来,关于沙棘组织培养研究已有不少报道,但目前其再生植株的获得率不高且移栽成活率低而不稳,组培再生技术体系仍需进一步改进和优化。脂肪酸去饱和酶2（Fatty acid desaturase 2,FAD2）是催化油酸生成亚油酸的关键酶,与植物抗逆性和油脂的品质关系密切,目前尚未见到其全长基因克隆等研究报
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沙棘（Hippophae rhamnoides）是具有重要生态功能和经济开发价值的优良树种。近几十年来,关于沙棘组织培养研究已有不少报道,但目前其再生植株的获得率不高且移栽成活率低而不稳,组培再生技术体系仍需进一步改进和优化。脂肪酸去饱和酶2（Fatty acid desaturase 2,FAD2）是催化油酸生成亚油酸的关键酶,与植物抗逆性和油脂的品质关系密切,目前尚未见到其全长基因克隆等研究报道。本论文开展了中国沙棘（H.rhamnoides.subsp.sinensis Rousi）组织培养研究,同时对其Hr FAD2基因全长进行了克隆、表达分析和RNAi载体的构建。主要研究结果如下:1.获得了野外生长枝条的无菌培养物,但其存活率低（13.8%）且生长缓慢。2.筛选出无菌苗子叶和胚轴愈伤组织诱导率较高的培养基,分别为WPM+0.8mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+100 mg/L Vc和WPM+0.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+100 mg/L Vc,诱导率分别为90.9%和44.9%。3.筛选出再生芽分化及生长较好的培养基,即WPM+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+100 mg/L Vc,子叶和胚轴愈伤组织的再生芽分化率分别为80.6%和56.0%,每块愈伤组织的平均再生芽数分别为13.6个和16.1个。4.将再生苗在培养瓶内生根不仅生根率低（36.4%）,而且根的生长缓慢;将再生苗直接移栽到营养土中进行瓶外生根可以提高生根率（42.9%）,同时根的生长速度明显加快。5.克隆到Hr FAD2基因的全长c DNA和g DNA,后者编码区内不含内含子。其编码蛋白由383个氨基酸残基组成,氨基酸序列中含有FAD家族酶活性所必须的保守组氨酸簇和内质网定位信号序列。在分子进化上,Hr FAD2与大豆Gm FAD2-1和油桐Vf FAD2关系较近。6.RT-q PCR分析表明,Hr FAD2基因的转录水平在沙棘幼果中最高,其次为侧根、半成熟果实和成熟果实,而在嫩枝和叶片中最低。7.以植物表达载体p CAMBIA3301为基础,成功构建了Hr FAD2基因的RNAi载体。本论文为进一步建立沙棘高效组培再生体系和开展Hr FAD2基因功能分析等研究奠定了基础。
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