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金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus, S.aureus)是导致临床感染和食物中毒的重要致病菌。S. aureus产生的肠毒素是S.aureus细菌性食物中毒的主要原因。畜禽动物S. aureus感染可引起动物致病,抗生素在预防和治疗动物疾病的同时将使S.aureus产生耐药性或耐药性增强,导致食源耐药性S.aureus的污染研究成为世界各国研究的热点。我国养殖业中广泛应用抗生素,使得产肠毒素和具有耐药性的S.aureus在食品尤其是牛乳及其制品中广泛存在,并且可通过环境和食物链的直接作用或间接作用对人体健康造成危害。因此本文从四川省部分牛乳生产企业采集生产环节(生鲜牛乳-车间半成品牛乳-成品牛乳)样品进行S.aureus的分离鉴定,并对收集的菌株进行肠毒素基因(sea、seb、sec、sed)分析和耐药性检测及相关耐药基因(mecA、blaZ)分析,主要结果如下。1.乳品生产链S.aureus的污染分析2010年至2011年从四川部分牛乳生产企业牛乳生产链(生鲜牛乳-车间半成品牛乳-成品牛乳)采集样品共计893份,用GB4789.10-2010方法检测结合科玛嘉金黄色葡萄球菌显色培养基特异分离鉴定出196株S.aureus,样品总检出率为21.9%(196/893),其中生鲜牛乳检出率(26.4%)最高,车间半成品牛乳(7.1%)及成品牛乳(5.7%)次之。2.乳品生产链S.aureus肠毒素分析采用M-PCR方法检测126株S.aureus分离株的肠毒素基因(sea-sed)携带情况,结果显示23.0%(29株)菌株携带肠毒素基因,其中,生鲜牛乳源、车间半成品牛乳源及成品牛乳源菌株肠毒素基因携带率分别为23.5%(27株)、0.0%(0株)及40.0%(2株);126株S.aureus菌株各分型肠毒素基因sea、seb、sec、sed的总检出率分别为14.3%(18株)、10.3%(13株)、5.6%(7株)、3.2%(4株),成品牛乳源S.aureus40%(2株)含sea基因。M-PCR法和ELISA法对肠毒素的检测存在差异,有3株S.aureus分离株检出肠毒素编码基因但肠毒素表型为阴性。3.乳品生产链S.aureus的耐药性分析采用CLSI推荐的肉汤微量稀释法对126株S.aureus进行12种抗生素(组合)的药敏试验,参考CLSI标准(2010)对药敏结果进行判定。结果显示,试验菌株对AMP(97.6%)耐药率最高,其他依次是PEN (93.7%)、AMC (56.3%)、SXT (50.0%)、TET(37.3%)、ERY(29.4%)及CLI(29.4%)；所有菌株对OXA、CEF、FLO敏感,三个生产环节的S.aureus分离株对抗生素的耐药性有差异。测试菌株多重耐药率为57.9%,共产生了26种耐药谱,主要对青霉素类、磺胺类、ERY、TET、CLI多重耐药。采用M-PCR法分析126株S.aureus分离株的nuc、mecA及blaZ基因发现,126株S.aureus的nuc、blaZ、mecA阳性检出率分别为100.0%(126/126)、70.6%(89/126)及0.0%(0/126),其中,成品牛乳源分离株blaZ检出率最高为100.0%(5/5),其他依次为生鲜牛乳源S.aureus分离株70.8%(80/113)及车间半成品牛乳源分离株50%(4/8)。菌株对p-内酰胺类抗生素的耐药性与其相关耐药基因(blaZ)具有较强关联性。本研究分析了S.aureus在乳品生产链的污染情况,并对其产肠毒素情况和耐药情况进行了调查,为食源性S.aureus风险评估提供了基础数据,为乳品生产中HACCP的建立以及今后分析S.aureus耐药性变迁提供了理论依据。论文研究结果具有一定的理论意义和实际应用价值。