【摘 要】
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来自瘤胃微生物的t10c12-CLA共轭亚油酸,具有独特的生物学活性,能够减少动物的白色脂肪沉积、下调乳脂的合成等作用,哺乳动物自身不能合成t10c12-CLA。课题组在前期研究中,通过在小鼠3T3细胞中表达来自痤疮丙酸杆菌亚油酸异构酶基因pai,使小鼠3T3细胞能够自身高效合成t10c12-CLA;同时研制了能够在各组织中表达t10c12-CLA的pai转基因小鼠。本论文以此转基因小鼠为材料,进
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来自瘤胃微生物的t10c12-CLA共轭亚油酸,具有独特的生物学活性,能够减少动物的白色脂肪沉积、下调乳脂的合成等作用,哺乳动物自身不能合成t10c12-CLA。课题组在前期研究中,通过在小鼠3T3细胞中表达来自痤疮丙酸杆菌亚油酸异构酶基因pai,使小鼠3T3细胞能够自身高效合成t10c12-CLA;同时研制了能够在各组织中表达t10c12-CLA的pai转基因小鼠。本论文以此转基因小鼠为材料,进行了以下研究工作。首先,为检测t10c12-CLA对胚胎增重的影响,对胚胎期18.5天(18.5dpc)转基因小鼠的重量和胎盘重量进行分析。结果发现:与同窝野生型对照相比,pai雄性胚胎(mean±SD;1.47±0.15 g versus 1.43±0.19 g)和雌性胚胎(1.43±0.17 g versus 1.39±0.18g)重量均无显著差异(p>0.05),对应胎盘重量亦无显著差异,表明t10c12-CLA对胚胎及胎盘的增重没有影响;但pai雌性胚胎的窝均数量显著少于野生型(2.96±2.07 versus 4.48±2.08,p<0.05),雄性胚胎数则无显著差异。其次,为检测t10c12-CLA对断奶前仔鼠增重的影响,对3周龄仔鼠的体重变化进行分析。结果发现:与同性别的非转基因小鼠相比,野生型母鼠哺乳时,pai雄仔(11.65±1.46 g versus 11.58±1.57g)和雌仔(11.96±1.34 g versus 11.45±1.29 g)的断奶重没有区别(p>0.05),3 周龄雄仔(7.72±1.11 mmol/Lversus 7.94±1.12 mmol/L)和雌仔(7.99±0.85 mmol/L versus 8.61±0.95 mmol/L)的尾静脉血糖水平也没有显著差异(p>0.05)。考虑到转基因母乳中可能存在t10c12-CLA或其它成分变化,本研究进一步用交叉养育的方法,分析转基因母乳对幼仔增重的影响。结果发现,仅pai母乳喂养的pai雄仔断奶重显著低于野生型母乳喂养的pai雄仔(16.78±2.24 g versus 18.09±2.86g,p<0.05)。随后,为分析t10c12-CLA对肥胖型小鼠增重的影响,对高脂饲料诱导的pai肥胖小鼠进行了研究。结果发现,实验周期内,pai雄鼠体重始终低于野生型雄鼠(p<0.05);pai雌鼠体重未见显著变化(p>0.05)。对脂肪分解相关基因进行Real-time PCR分析后发现,转基因小鼠肝脏组织中ucp2基因明显上调(p<0.05)。最后,为了获得更高表达的pai的转基因小鼠,经CAG-pai表达载体的C57BL/6J受精卵原核显微注射并通过Southern blot、RT-PCR及Western blot鉴定新得到一种能够表达PAI酶转基因家系小鼠,为继续研究t10c12-CLA的功能及其作用机制提供了新材料。
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