食管癌是人类最常见的六大恶性肿瘤之一，具有显著的地域性分布差异，高低发区发病率相差高达500倍，每年全世界新增加的30万患者中有50％发生在中国。河南省林州市及其毗邻的辉县、安阳等地区是中国，也是世界上发病率和死亡率最高的地区，其男女性年发病率分别高达161／10万，103／10万。食管癌预后差，中晚期患者5年存活率仅为10％。目前食管癌仍然是该地区居民肿瘤相关死亡的主要原因。近年来流行病学和分子生物学的研究加深了人们对肿瘤发病机制的了解，但食管癌确切的发病因素和食管上皮癌变多阶段演进的发生机制尚不清楚，缺乏有效的预防措施和早期诊断指标。高发区人群普查是发现早期食管癌患者的主要手段。早期食管癌患者的5年生存率可提高到90％以上，由于缺乏敏感有效、方便易行的早期诊断指标和方法，临床上仍以中、晚期患者为主。近年的研究提示肿瘤血管生成与肿瘤快速生长、转移密切相关，因此探索食管癌血管生成的调节机制，寻求新的治疗方法和手段，对提高食管癌患者的生存率、防止复发具有重要意义。 肿瘤新生血管是在周边组织原有的血管基础上延伸扩展形成的。无血管生长期肿瘤细胞的增殖速度与有血管肿瘤细胞的增殖速度并无差异，但其细胞生存率与死亡率达到动态平衡，肿瘤体积保持在微小状态。当肿瘤体积增至1～2mm~3时，肿瘤已不能依靠弥散获取氧气和营养物质，如果无新生毛细血管长入，肿瘤组织将保持休眠状态或发生退化。一旦血管长入肿瘤，这些血管为日益扩增的原发肿瘤提供养料，肿瘤在生长过程中也分泌多种物质来促进新生血管的进一步形成。与此同时，这些丰富的毛细血管也为肿瘤细胞侵袭进入循环系统提供了良好的机会。血管生成食瞥癌血管生成调节机制研究及血管调节因于对肿血结构血管和灌注血管的影响过程包括：血管内皮基底膜溶解，内皮细胞向肿瘤组织迁移，内皮细胞在迁移前沿增殖，内皮细胞管道化、分支形成血管环，形成新的基底膜。这一复杂过程是肿瘤细胞、血管内皮细胞以及细胞外基质微环境相互作用的结果，受多种促血管生成因子和／或血管生成抑制回子的调节。有资料显示肿瘤血管是一种高水平的生长因子引起和维持的、缺乏周细胞包围的未成熟血管系统。去除生长因子不仅使新生血管的生长停滞，同时可引起未成熟的肿瘤血管解聚。近年有关肿瘤血管生成调节因子以及抗血管治疗的研究日益受到学者的重视，并已有较多的报道，但有关食管癌高发区居民食管癌血管生成调节机制的研究报道甚少。本研究采用多探针RNA酶保护性分析方法首次系统的从RNA水平检测高发区食管癌患者癌组织和癌旁组织血管生成因子以及与血管生成有关的细胞因子／化学因子的表达，对肿瘤组织血管进行定量分析，与各种血管生成因子进行相关分析。并分析了FGFZ及VEGF对食管癌结构血管和灌注血管的影响。本研究旨在阐明与食管癌快速生长、转移密切相关的血管生成调节机制，发现关键调节因子，为探索食管癌抗血管生成治疗的靶点奠定基石出。材料禾方法 门）30例食管癌病人的新鲜手术切除标本来自食管癌高发区河南省林州市人民医院 1999年 3月至 5月间手术病人。术前均未进行过化疗和放疗。男门例，女I3例，平均年龄56士9岁，年龄范围43～刀岁。术中切除的食管癌和癌旁组织标本迅速放入液氮中，之后储存于E0 oC冰箱中备用。手术切除标本病理学检查证实均为食管鳞状细胞癌，其中高中分化26例，低分化4例。所有标本进行多部位取样提取RNA，并分别制作冰冻和石蜡切片。采用多探针RNA酶保护性分析方法检测食管鳞癌中血管生成调节因子及相关因子的InRN水平，用免疫组织化学方法对食管癌组织中血管进行检测，采用自动移动数码成像系统和 image中roghus软件对血管平均距离（密度）进行定量检测，并分析食管鳞癌中血管生成调节因子及相关因子与血管平均距离（密度）的相关关系。郑州大学医学院99级博士生沦文·2· 食忏癌血管生成调节机制研究及血竹调节因子对肿瘤结构血怜和浓注血仔的影响 门）利用食管癌细胞系TEl（鳞状细胞癌），SEG4和 BIC刁u癌人 采用体外细胞培养技术观察重组人FGFZ、VEGF对三种细胞系生长增殖的影响，采用多探针RNA酶保护性分析方法检测三种细胞系的基础 FGFZ和 VEGF mRNA水平，采用免疫组织化学和免疫荧光方法分别观察FGFZ和 VEGF对三种细胞系荷瘤裸鼠模型中食管癌组织结构血管和灌注血管平均距离（密度）的影响。 门）统计学分析：数据均用均数士标准差表示，均数的比较采用t检验，两指标相关关系采用直线相关分析，Pearson检验。以。一0刀5为检验水准，P＜0刀5具有统计学意义。结 果 门）食管癌组织中 VEGF及其受体 Fltl 和 Fit4 mKNA水平（分别为 145．48土20，26二2士2．5，20二7士1，3，注：该数值为待测血管调节因子mRNA与其自身看家基因 L32m伽A的比值。）较癌旁组织（分别为 95．84土7．5，18．64土2．2，14．02士1．0）明显增高，具有显著统计学意义（Prto．