目的：　　 建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型，观察吡那地后处理对缺血再灌注损伤大鼠心脏功能的影响。运用蛋白质组学研究方法，探讨吡那地尔后处理对大鼠心肌线粒体蛋白质的表达变化。　　 方法：　　 1.建立Langendorff大鼠离体心脏缺血再灌注损伤模型。18只成年雄性SD大鼠随机分为正常组(Nor)、缺血再灌注损伤组(Con)和吡那地尔后处理组(Pina)，每组6只。　　 灌注方案：　　 Nor组：持续灌注Kerbs-Henseleit缓冲液(K-H液)120 min，无缺血再灌注损伤。Con组和Pina组：缺血前先灌注K-H液平衡20 min，灌注4℃ ST-Thomas停跳液，使全心缺血40 min后，按以下方案灌注：①Con组：灌注K-H液60 min；②Pina组：灌注K-H液前给予50μmol/L吡那地尔2 min，继之K-H液58 min。观察各组平衡末及灌注末心率(HR)、左室发展压(LVDP)、左室舒张末压(LVDEP)、以及最大dp/dt等心功能的变化。　　 2.差速离心和Nycodenz密度梯度离心分离纯化大鼠心肌线粒体，Western blot验证其纯度。　　 3.提取线粒体蛋白质，采用双向电泳技术(2-DE)对蛋白质进行分离，利用PDQuest8.0软件分析各组蛋白质表达的差异。选取差异在2倍以上的蛋白质点，采用MALDI-TOF-MS鉴定。　　 4.Western blot法回复验证部分差异蛋白质的表达变化，证实双向电泳结果的可靠性。　　 结果：　　 1.平衡末各组间心功能无明显差异，续灌末Nor组和Pina组心功能明显优于Con组(P<0.05)；　　 2.Western blot证实了Nycodenz密度梯度离心法提取的线粒体富集程度较高；　　 3.对各组线粒体蛋白进行2-DE，每张胶上检测出480±22个蛋白质斑点；PDQuest8.0软件分析后得到11个差异蛋白质，经MALDI-TOF-MS分析，均成功鉴定；　　 4.Nor组与 Con组比较发现：NADH脱氢酶铁硫蛋白2(NDUFS2)表达升高，ATP合酶α亚单位(ATPA)、电子传递黄素蛋白α亚单基(ETFA)和细胞色素C1亚基2表达降低。Pina组与 Con组比较发现：NDUFS2、NADH脱氢酶I10α亚基(NDUFA10)和NADH脱氢酶黄素蛋白2亚基(NDUFV2)表达升高。异柠檬酸脱氢酶α亚基(IDHA)和Delta(3，5)-Delta(2-4)-dienoyl辅酶A异构酶(ECH1)表达降低。有两个蛋白质点被鉴定为ATP合酶d亚基，一个蛋白点表达升高，而另一个蛋白点表达降低。　　 5.回复验证：据质谱结果，检测NDUFS2、ATPA和NDUFA10在各组的表达变化。Nor组ATPA的表达高于Con组(P<0.05)，而NDUFS2表达低于Con组(P<0.05)；Con组NDUFS2和NDUFA10的表达高于Pina组(P<0.05)。这些蛋白质的表达变化与2-DE结果一致。　　 结论：　　 1.吡那地尔后处理能减轻心肌缺血/再灌注损伤，有保护缺血心肌、改善心功能的作用；　　 2.(1)吡那地尔后处理降低了NDUFS2、NDUFA10和NDUFV2的代偿性升高，这种变化可能与mitoKATPC开放心肌保护作用机制有关，它们可能是mitoKATpC开放心肌保护作用的靶蛋白；　　 (2)吡那地尔后处理可引起ATP合酶d亚基发生磷酸化，这种修饰可能参与了mitoKATPC开放的心肌保护作用机制；　　 (3)吡那地尔后处理可促进IDHA和ECH1表达；　　 (4)ATPA、ETFA和细胞色素C1亚基2可能是心肌损伤的标识蛋白，而NDUFS2可能是心肌损伤的保护蛋白；　　 3.Nycodenz不连续密度梯度离心法可获得较高纯度的心肌线粒体。