【摘 要】
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目的:1)探讨原癌基因c-Myc在人髓母细胞瘤细胞系UW228-2和UW228-3细胞内以及髓母细胞瘤和瘤周小脑的石蜡包埋组织微阵列中的表达情况;2)观察白藜芦醇对髓母细胞瘤细胞系c-Myc
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目的:1)探讨原癌基因c-Myc在人髓母细胞瘤细胞系UW228-2和UW228-3细胞内以及髓母细胞瘤和瘤周小脑的石蜡包埋组织微阵列中的表达情况;2)观察白藜芦醇对髓母细胞瘤细胞系c-Myc表达的影响及其与细胞生长和存活的关系;3)分析c-Myc对细胞生长和细胞周期的作用。通过上述研究,进一步了解:白藜芦醇抗髓母细胞瘤作用的分子机制和c-Myc与髓母细胞瘤生长、分化和凋亡之间的关系,以期加深对髓母细胞瘤细胞分子生物学特点的认识并为改善临床髓母细胞瘤的治疗现状提供新的实验室指标和理论根据。方法:人髓母细胞瘤细胞系UW228-2和UW228-3培养于含10%进口胎牛血清的DMEM(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium)培养基中, 5 x 104/ml密度的细胞培养于Φ60和Φ100mm的培养皿中,培养24小时。白藜芦醇溶解于二甲基亚砜(DMSO,demethylsulfoxide)溶液中,以5mM的浓度储存,使用前稀释到100μM。采用Trypan Blue计数法检测各实验组中细胞的增殖活性,免疫细胞化学、免疫荧光、RT-PCR和Western-blot等方法系统地分析了各实验组中c-Myc基因表达水平的改变及其与白藜芦醇诱导的细胞分化和凋亡的关系。用从临床收集的11例髓母细胞瘤及非瘤脑组织的石蜡包埋标本制成石蜡组织微阵列,进行c-Myc的免疫组织化学染色。采用流式细胞仪检测正常培养和经白藜芦醇处理的UW228-2细胞系细胞周期的变化及细胞凋亡情况。用阳离子脂质体转染法将c-Myc反义寡核苷酸导入UW228-2细胞以封闭基因表达,而后观察细胞周期的变化、细胞凋亡的情况并与来自白藜芦醇处理细胞系的相应指标加以对照。结果:1)组织微阵列的免疫组化结果显示:在11例人髓母细胞
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