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研究背景 垂体泌乳素腺瘤是一种以分泌过量泌乳素为主要特点的功能性垂体腺瘤,目前发病机制仍不清楚,治疗方法包括手术切除、药物溴隐亭治疗,但存在耐药性等弊端。因此,急需探索泌乳素腺瘤的发病机制,并且开发新型的治疗药物。NLRP3炎症小体异常激活与肿瘤、慢性肾脏病、关节病、静脉血栓等多种重大疾病密切相关。已经证实NLRP3炎性小体介导的炎症因子IL-1β和IL-18可促进多种肿瘤的发生,如神经胶质瘤、鼻咽癌、头颈鳞状细胞癌等。研究目的 本课题拟研究NLRP3炎性小体在垂体泌乳素腺瘤中的作用和机制,以及靶向NLRP3炎性小体的小分子抑制剂MCC950的治疗作用,具体分为六章内容:1)泌乳素腺瘤大鼠模型中垂体炎症和NLRP3炎性小体的表达;2)泌乳素腺瘤人体标本中NLRP3炎性小体的表达和定位;3)溴隐亭对泌乳素腺瘤大鼠垂体NLRP3炎性小体的作用;4)NLRP3基因敲除对泌乳素腺瘤小鼠垂体生长和泌乳素表达的影响;5)NLRP3炎性小体活化对垂体瘤细胞泌乳素表达的影响;6)NLRP3炎性小体抑制剂MCC950对泌乳素腺瘤大鼠垂体生长和泌乳素表达的影响。一、泌乳素腺瘤模型大鼠中垂体炎症和NLRP3炎性小体的表达研究目的:研究泌乳素腺瘤模型大鼠中垂体炎症和NLRP3炎性小体的表达研究方法:大鼠按20mg/kg的剂量腹腔注射苯甲酸雌二醇后制备泌乳素腺瘤模型,作为研究对象。1)运用PET-CT成像检测大鼠垂体组织中的炎症情况;2)运用基因芯片分析大鼠垂体组织的差异基因和信号通路;3)ELISA法检测大鼠血清泌乳素（prolactin,PRL）蛋白水平;4)Western blotting检测大鼠垂体组织PRL和NLRP3炎性小体的表达;5)免疫荧光分析大鼠垂体组织NLRP3炎性小体的表达。结果:1)与正常对照组比较,雌二醇诱导的泌乳素腺瘤大鼠垂体组织中移位蛋白（TSPO）表达显著升高,垂体组织炎症程度显著升高;2)与正常对照鼠比较,泌乳素腺瘤模型大鼠垂体组织中先天免疫反应基因显著上调;3)与正常对照组相比,雌二醇诱导的泌乳素腺瘤模型组大鼠血清PRL蛋白含量显著升高;4)与正常对照组比较,雌二醇诱导的泌乳素腺瘤大鼠垂体组织PRL蛋白和NLRP3炎性小体表达显著升高;5)与正常对照组比较,泌乳素腺瘤模型大鼠垂体组织中NLRP3蛋白表达显著增加。二、泌乳素腺瘤人体标本中NLRP3炎性小体的表达和定位研究目的:研究泌乳素腺瘤人体标本中NLRP3炎性小体的表达和定位。研究方法:1)免疫组化分析人垂体标本的NLRP3蛋白;2)免疫荧光分析人垂体标本的NLRP3蛋白;3)免疫荧光分析人垂体标本的ASC蛋白。结果:1)与非功能性垂体标本比较,泌乳素腺瘤标本中NLRP3蛋白表达显著增加;2)泌乳素腺瘤标本中NLRP3蛋白与IBA-1蛋白呈现共定位现象;3)与非功能性垂体标本比较,泌乳素腺瘤标本中ASC蛋白表达显著增加。三、溴隐亭对泌乳素腺瘤大鼠垂体NLRP3炎性小体的作用研究目的:研究溴隐亭对泌乳素腺瘤大鼠垂体NLRP3炎性小体的作用。研究方法:大鼠按20 mg/kg的剂量腹腔注射苯甲酸雌二醇后制备泌乳素腺瘤模型,作为研究对象。1)ELISA法检测大鼠血清PRL蛋白水平;2)Western blotting检测大鼠垂体PRL和NLRP3炎性小体蛋白的表达。结果:1)与正常对照组比较,雌二醇诱导的模型大鼠血清PRL含量显著增加;与模型组比较,溴隐亭（0.9 mg/kg或1.8 mg/kg）组大鼠血清PRL含量均显著降低;2)与正常对照组比较,雌二醇诱导的模型大鼠垂体PRL蛋白表达显著增加;与模型组比较,溴隐亭（1.8 mg/kg）组大鼠垂体PRL蛋白表达显著降低。与正常对照组比较,雌二醇诱导的模型大鼠垂体NLRP3蛋白表达显著增加;与模型组比较,溴隐亭（1.8 mg/kg）组大鼠垂体NLRP3蛋白表达显著降低。四、NLRP3基因敲除对泌乳素腺瘤小鼠垂体生长和泌乳素表达的影响研究目的:研究NLRP3基因敲除对泌乳素腺瘤小鼠垂体生长和泌乳素表达的影响。研究方法:1)计算每组小鼠垂体重量/小鼠体重（mg/g）比值;2)ELISA法检测大鼠血清PRL蛋白水平;3)Western blotting检测小鼠垂体PRL和NLRP3蛋白表达;4)免疫组化分析小鼠垂体NLRP3蛋白表达。结果:1)与野生型组比较,雌二醇诱导的或DRD2（-/-）模型小鼠垂体重量/体重值显著增加;与模型组比较,雌二醇诱导的或DRD2敲除的NLRP3（-/-）小鼠垂体重量/体重值显著降低;2)与野生型组比较,雌二醇诱导的或DRD2（-/-）模型小鼠血清PRL水平显著增加;与模型组比较,雌二醇诱导的或DRD2敲除的NLRP3（-/-）小鼠血清PRL水平显著降低;3)与野生型组比较,雌二醇诱导的或DRD2（-/-）模型小鼠垂体PRL和NLRP3蛋白表达显著增加;与模型组比较,雌二醇诱导的或DRD2敲除的NLRP3（-/-）小鼠PRL和NLRP3蛋白表达显著降低;4)与野生型组比较,雌二醇诱导的或DRD2（-/-）模型小鼠垂体NLRP3炎性小体蛋白水平显著增加;与模型组比较,NLRP3（-/-）组小鼠和雌二醇诱导的或DRD2敲除的NLRP3（-/-）小鼠垂体NLRP3炎性小体蛋白未见明显表达。五、NLRP3炎性小体活化对垂体瘤细胞泌乳素表达的影响研究目的:研究NLRP3炎性小体活化对垂体瘤细胞泌乳素表达的影响。研究方法:1)刺激物加入GH3细胞后PRL和NLRP3炎性小体表达的检测;2)刺激物和NLRP3炎性小体抑制剂MCC950加入GH3细胞后PRL和NLRP3炎性小体表达的检测。结果:1)与空白组比较,LPS组细胞裂解物PRL蛋白表达显著增加,且NLRP3、Caspase-1、Pro-IL-1β、IL-1β蛋白表达均显著增加;LPS+MSU组细胞裂解物PRL蛋白表达显著增加,且NLRP3、Caspase-1、Pro-IL-1β、IL-lβ蛋白表达均显著增加;LPS+ATP组细胞裂解物PRL蛋白表达显著增加,且NLRP3、Caspase-1、Pro-IL-1β、IL-1β蛋白表达均显著增加;LPS+Ni组细胞裂解物PRL蛋白表达显著增加,且NLRP3、Caspase-1、Pro-IL-1β、IL-1β蛋白表达均显著增加;与空白组比较,MSU、ATP和Ni组细胞蛋白裂解物组PRL和NLRP3炎性小体蛋白表达均无显著性差异;2)与对照组比较,加LPS和尼日利亚菌素Ni的GH3细胞裂解物中PRL蛋白水平显著增加,而且NLRP3、Caspase-1 p45、Pro-IL-1β和IL-1β均显著增加;而同时给予10μM的MCC950 后的 GH3 细胞裂解物中 PRL、NLRP3、Caspase-1 p45、Pro-IL-1β 和 IL-1β蛋白均显著降低。六、NLRP3炎性小体抑制剂MCC950对泌乳素腺瘤大鼠垂体生长和泌乳素表达的影响研究目的:研究NLRP3炎性小体抑制剂MCC950对泌乳素腺瘤大鼠垂体生长和泌乳素表达的影响。研究方法:大鼠按20mg/kg的剂量腹腔注射苯甲酸雌二醇后制备泌乳素腺瘤模型,作为研究对象。1)计算每组大鼠垂体重量/大鼠体重（mg/g）比值;2)ELISA法检测大鼠血清PRL蛋白水平;3)Western blotting检测大鼠垂体PRL和NLRP3蛋白表达结果:1)与正常对照组比较,雌二醇诱导的模型大鼠垂体重量/体重值显著增加;与模型组比较,MCC950（10 mg/kg或20 mg/kg）组大鼠垂体重量/体重值显著降低;2)与正常对照组比较,雌二醇诱导的模型大鼠血清PRL含量显著增加;与模型组比较,MCC950（10 mg/kg或20 mg/kg）组大鼠血清PRL含量均显著降低;3)与正常对照组比较,雌二醇诱导的模型大鼠垂体PRL蛋白表达显著增加;与模型组比较,MCC950（20 mg/kg）组大鼠垂体PRL蛋白表达显著降低。与正常对照组比较,雌二醇诱导的模型大鼠垂体NLRP3蛋白表达显著增加;与模型组比较,MCC950（20 mg/kg）组大鼠垂体NLRP3蛋白表达显著降低。研究结论:首次发现垂体中NLRP3炎性小体活化促进了泌乳素腺瘤的发生,NLRP3炎性小体抑制剂MCC950对泌乳素腺瘤有显著的抑制作用。