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百脉根(Lotus corniculatus L.)是世界范围内广泛种植的多年生优质豆科牧草。AP2/ERF转录因子是植物特有的一大类超家族蛋白,在高盐、干旱等逆境胁迫下发挥重要的作用。目前已从多种植物的全基因组中分离鉴定出AP2/ERF家族基因并进行了研究,但是在百脉根中还未见报道。因此,本研究以百脉根栽培品种“里奥”为材料,从全基因组中分析AP2/ERF超家族成员、进化起源及其盐胁迫下表达谱,批量克隆盐诱导表达基因,转化拟南芥进行功能分析,筛选出耐盐优良调控基因,转化百脉根“里奥”进行功能验证,旨在系统、深入地解析百脉根AP2/ERF家族基因的功能与分子机制,具体结果如下:1.从百脉根全基因组中分离、鉴定出了127个AP2/ERF超家族成员,根据AP2结构域的数量和序列相似性,将其分为五个亚家族,分别是:AP2亚家族有19个成员,RAV亚家族有1个成员,DREB亚家族有40个成员,ERF亚家族有66个成员,单独(Soloist)亚家族有1个成员。同时,还分析了 106个EREBP类转录因子的保守基序,结果发现除了含有与拟南芥相似的保守基序外,还有百脉根所特有的保守基序。2.通过qRT-PCR技术分析了 107个LcAP2/ERF基因在盐胁迫下的表达谱,筛选出了 19个盐诱导表达基因和10个盐抑制表达基因;通过分析18个基因在拟南芥中的耐盐表型,筛选出了5个具有显著耐盐表型的盐胁迫优良调控基因,分别是LcERF053、LcERF054、LcERF056、LcERF080和LcAP2/ERF107,其显著提高了转基因植物的耐盐性。3.分析了5个盐胁迫优良调控基因的分子特征,组织表达特异性结果表明:4个转录因子在根、茎、叶、花和种子中表达,仅基因LcERF056在茎、叶中表达;5个转录因子LcERFs受4种激素(脱落酸、乙烯、水杨酸、茉莉酸)诱导表达的模式差异很大,在受胁迫诱导的种类和时间上均有不同;5个转录因子LcERFs都分别编码一个核蛋白,并且转录因子LcERF053、LcERF054、LcERF056和LcAP2/ERF107在酵母中有转录激活活性。4.对5个盐胁迫优良基因进行了详细的功能分析,检测了转基因拟南芥的生理生化指标,结果表明,在盐胁迫下,转基因拟南芥的相对含水量、可溶性糖、脯氨酸含量相对野生型都显著提高,而电导率或MDA含量显著下降,从生理生化水平上进一步证实了转基因拟南芥显著提高了耐盐性。同时,采用qRT-PCR分析了转基因拟南芥中抗逆相关指标基因的表达变化,结果表明不同的转录因子是通过调控下游不同的抗逆指标基因以提高植物耐盐性。5.探索了基因LcERF056的分子调控机制,酵母单杂交结果表明转录因子LcERF056能与GCC顺式元件结合,并且其转录激活结构域在101-119之间。6.通过农杆菌介导法将盐胁迫优良基因LcERF056导入了百脉根栽培品种“里奥”,获得了转基因百脉根植株20株,功能验证结果表明,转基因植株耐盐性明显提高。本研究从百脉根AP2/ERF家族中筛选出了 5个盐胁迫优良调控基因LcERF053、LcERF054、LcERF056、LcERF080和LcAP2/ERF107,其分别通过参与不同的信号转导途径调控下游抗逆指标基因从而提高植株耐盐性,阐明了百脉根AP2/ERF的功能与分子调控机制,为豆科牧草或其他作物的抗逆分子育种提供了优良的基因资源,为深入揭示其调控网络奠定了基础。