【摘 要】
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塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)是引起猪塞内卡病的主要原因,其临床症状与其他水泡疾病相似而常被忽略,造成养猪业的经济受损,制约养猪业的健康发展,但目前还没有商品化疫苗,近几年来备受关注。本研究旨在通过对2019-2020年我国部分省份(直辖市、自治区)猪群SVA流行病学调查,分析SVA在我国的三间分布与毒株进化情况。并构建反向遗传平台,同时为进一步研究SVA致病机理、构建标记疫苗等
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塞内卡病毒（Senecavirus A,SVA）是引起猪塞内卡病的主要原因,其临床症状与其他水泡疾病相似而常被忽略,造成养猪业的经济受损,制约养猪业的健康发展,但目前还没有商品化疫苗,近几年来备受关注。本研究旨在通过对2019-2020年我国部分省份（直辖市、自治区）猪群SVA流行病学调查,分析SVA在我国的三间分布与毒株进化情况。并构建反向遗传平台,同时为进一步研究SVA致病机理、构建标记疫苗等奠定基础。首先,采集2019-2020年我国部分省份（直辖市、自治区）共3 995份的组织混合样品、血清样品,分别进行实时荧光定量RT-PCR和SVA竞争ELISA检测分析,并将检出的阳性样品进行病毒分离及基因组序列对比。结果显示,2019年13个省份（直辖市、自治区）92个场群的组织混合样品1 310份,个体阳性率为6.72%,群体阳性率为23.91%;5个省份（直辖市、自治区）21个场群的828份血清样品,个体阳性率为13.04%,群体阳性率为85.71%。2020年13个省份（直辖市、自治区）101个场群的组织混合样品1 397份,个体阳性率为8.66%,群体阳性率为36.63%;5个省份（直辖市、自治区）13个场群的460份血清样品,个体阳性率为7.61%,群体阳性率为46.15%。2019年下半年组织混合样品个体阳性率与群体阳性率均高于上半年,2020年检测结果与之相反。在成功分离出的10株毒株中,SVA-GXF011-2019、SVA-GXF053-2019、SVA-FJ036-2019、SVA-GX011-2019、SVA-FJ039-2019、SVA-Hu N032-2019与中国株SVA/GX/CH/2018同源性最高在99.20%-99.30%之间,SVA-FJ018-2019、SVA-SD069-2019、SVA-SD072-2019、SVA-SD074-2019与美国分离株USA/IN Purdue 36998/2016同源性最高,均为98.30%。其次,依次扩增CMV启动子、已分离鉴定的GXT91毒株为模板的SVA全基因组、poly A尾巴及丁肝核酶序列（HDVr）,利用同源重组技术,将3段核酸片段整合进低拷贝载体pWSK-29。结果显示,构建好的重组质粒pWSK-29-SVA转染至细胞的效率在70%左右,转染后的病毒盲传至第三代出现细胞病变现象,盲传第五代时的拯救毒株（rSVA）基因组测序结果均正确。不同时间点收获病毒,测定病毒滴度并绘制的生长曲线表现出与亲本GXT91毒株具有相似的复制能力和增殖特性。间接免疫荧光鉴定出特异性的绿色荧光。蚀斑的大小及形态与亲本GXT91毒株基本一致。综上所述,2019-2020年SVA在我国部分地区感染率仍较高、污染面仍较大。我国主要流行毒株在分支（Clade）Ⅰ中。而分离株SVA-FJ018-2019、SVA-SD069-2019、SVA-SD072-2019、SVA-SD074-2019单独出现一个新的分支（CladeⅥ）且与美国毒株同源性较高,有待进一步研究其生物学特征。同时本实验成功构建了SVA反向遗传平台质粒（pWSK-29-SVA）并成功拯救出塞内卡毒株（rSVA）,可为后续开展有关SVA的研究提供有效依据。
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