论文部分内容阅读
目的本研究通过Rho激酶抑制剂—法舒地尔对TGF-β1体外刺激下尿道成纤维细胞的增殖、细胞外基质合成以及参与尿道疤痕收缩的细胞骨架运动相关蛋白，如α-肌动蛋白(α-SMA)、磷酸化肌球蛋白轻链（myosin light chain phosphorylation，p-MLC）、 LIM激酶1(LIM kinase， LIMK-1)、磷酸化丝切蛋白(Cofilinphosphorylation，p-Cofilin)，以及I和III胶原蛋白的影响,进一步揭示尿道瘢痕发病机理，为各种纤维化疾病的发病机制提供新的理论和方法。方法取原代人尿道瘢痕成纤维细胞进行培养。实验分成8个组，培养液中分别加入TGF-β1(10ng/ml)，法舒地尔（12.5μmol/L，25μmol/L，50μmol/L），TGF-β1（10ng/ml）+法舒地尔（12.5μmol/L，25μmol/L，50μmol/L）以及正常对照组。用MTT比色法检测细胞活力；用流式细胞仪检测细胞的凋亡率；用Western-blot检测各组α-SMA、p-MLC、LIMK-1、p-Cofilin，以及I和III胶原蛋白的表达。结果TGF-β1能显著增加尿道成纤维细胞活力，能诱导α-SMA、p-MLC、LIMK-1、p-Cofilin，以及I和III胶原蛋白的表达，且随TGF-β1浓度的升高其诱导作用呈逐渐增强趋势。随着法舒地尔干预浓度增加，尿道成纤维细胞活力减弱；α-SMA、p-MLC、LIMK-1、p-Cofilin，以及I和III胶原蛋白的表达下降；流式细胞仪检测显示在无TGF-β1作用下，较高浓度法舒地尔组早期凋亡率高于对照组(P<0.05)；而加入TGF-β1作用下，法舒地尔对尿道成纤维细胞早期凋亡有明显的浓度依赖性。结论法舒地尔可能通过Rho/Rock信号通路抑制TGF-β1诱导的人尿道成纤维细胞的增殖、转化和分泌细胞外基质（ECM）等生物学行为，并诱导其早期凋亡。使细胞骨架运动相关蛋白α-SMA、p-MLC、LIMK-1、p-Cofilin表达下降，且成剂量依赖性。