【摘 要】
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目的:通过实验测定人退变的椎间盘组织中基质金属蛋白酶-9（matrixmetalloproteinase-9,MMP-9）、基质金属蛋白酶-28（matrix metalloproteinase-28,MMP-28）、白介素-17（Interleukin-17,IL-17）的基因表达水平,研究MMP-9、MMP-28、IL-17在人椎间盘退变机制中所扮演的角色及作用,观察不同退变等级的椎间盘髓核组
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目的:通过实验测定人退变的椎间盘组织中基质金属蛋白酶-9（matrixmetalloproteinase-9,MMP-9）、基质金属蛋白酶-28（matrix metalloproteinase-28,MMP-28）、白介素-17（Interleukin-17,IL-17）的基因表达水平,研究MMP-9、MMP-28、IL-17在人椎间盘退变机制中所扮演的角色及作用,观察不同退变等级的椎间盘髓核组织MMP-9、MMP-28、IL-17的表达是否存在差异,若存在差异,分析具体原因和差异情况,为椎间盘退变的治疗提供一定的理论基础。方法:选取于2019年3月10日至2019年6月20日60例在广西壮族自治区人民医院脊柱骨病外科因腰椎间盘突出需行椎间盘摘除及髓核摘除的患者,取其椎间盘髓核标本作为退变组,根据患者的影像学检查结果,按照腰椎间盘突出患者的突出类型,进一步进行分组,其中,29例突出型的归为突出组,19例脱出型的归为脱出组,12例游离型的归为游离组。所需样本由外科手术获得后,立即放入-80℃冰箱中冷冻并保存,直至进行椎间盘髓核组织RNA和组织蛋白的提取。利用组织RNA提取技术与实时荧光定量PCR（Real time fluorescent quantitative PCR,RT-PCR）技术,分别检测各组椎间盘组织中MMP-9和MMP-28的m RNA的表达情况,观察各组间是否存在差异,同时采用Western Blot的方法检测各组椎间盘组织中MMP-28蛋白表达,应用免疫组织化学染色法检测各组椎间盘组织IL-17的表达情况。采用临床问卷调查与实验室检查相结合的方式进行相关资料的采集,结合实验室检查结果与患者相关的临床资料,分析MMP-9和MMP-28 m RNA转录水平与椎间盘退变患者的临床资料之间的相关性。结果:RT-PCR的结果表明,不同程度退变突出的椎间盘髓核组织中均有一定程度的MMP-9及MMP-28 m RNA表达,MMP-9及MMP-28的表达水平均随着椎间盘退变突出程度的加重而升高,且各组间相比较均有显著的统计学差异（P＜0.001）。Western-blot的结果表明,在游离组和脱出组的椎间盘髓核组织中MMP-28蛋白表达水平均显著高于突出组,差异具有统计学意义（P＜0.001）,游离组和脱出组相比较,MMP-28蛋白在游离组的表达更高,差异有统计学意义（P＜0.001）。免疫组织化学染色结果显示,在游离组、脱出组IL-17表达水平显著高于突出组,差异有统计学意义（P＜0.001）,游离组IL-17表达水平显著高于脱出组,差异有统计学意义（P＜0.001）。临床资料显示:突出组MMP-9表达水平与吸烟年限（P=0.005）具有正相关性,与其他因素等均无相关性（P＞0.05）,脱出组MMP-9表达水平与劳动强度（P=0.024）具有正相关性,与其他因素等均无相关性（P=0.05）,突出组MMP-28的表达水平与腰椎病变节段（P=0.018）、疼痛程度（P=0.002）、吸烟程度（P=0.034）、吸烟年限（P=0.028）具有正相关性,与其他因素等均无相关性（P＞0.05）,脱出组MMP-28的表达水平与疼痛程度（P=0.015）具有正相关性,与其他因素等均无相关性（P＞0.05）,游离组MMP-9及MMP-28表达水平与患者的年龄、性别、疼痛程度、劳动强度、吸烟程度、吸烟年限、ESR、CRP、腰椎病变节段、症状的持续时间等均无相关性（P＞0.05）。结论:本研究证实在人退行性椎间盘组织中MMP-9、MMP-28及IL-17的表达显著增加,其表达水平随着人椎间盘退变突出程度的加重而升高。MMP-9表达在突出组与吸烟年限呈正相关性,在脱出组与劳动强度呈正相关性,推测吸烟、过度劳累可能会加剧椎间盘的破坏。MMP-28表达在突出组与吸烟年限、吸烟程度、病变节段、疼痛程度呈正相关性,在脱出组与疼痛程度呈正相关性,推测吸烟以及不良的行为姿势可能加剧椎间盘的破坏,推测疼痛可能通过增加炎性反应的程度,加重腰椎间盘突出的病情。
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