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心脏骤停是常见的严重临床事件,有着高发病率、低生存率的特点。目前,虽然心肺复苏的理论和方法有了很大提高,但大多数以患者死亡终归。复苏后期患者死亡的主要原因是大脑缺血缺氧性损伤。因此,如何有效的提高脑复苏的成功率,降低中枢神经损伤,是增加心肺复苏后存活率的关键。1992年,国家中医药管理局批准参附注射液为“全国中医院急诊室必备中成药”。近年来开展的参附注射液大量基础研究表明,其治疗再灌注损伤有明显疗效。本研究运用动物实验以及组织病理生物学等的分析方法,证明参附注射液对窒息合并氯化钾法诱导的心脏骤停大鼠复苏后的脑细胞损伤有改善作用,主要研究内容和实验结果如下:目的:通过自噬相关通路NogoA/mTOR/STAT3在心脏骤停心肺复苏后大鼠海马组织中表达水平的研究,探讨参附注射液改善大鼠复苏后脑损伤的机制。方法:健康SD大鼠120只,选取80只维持窒息合并冰氯化钾法诱导心脏骤停后无处理两分钟,随后给予心肺复苏、机械通气及急救药物静脉注射抢救,动物自主循环恢复后随机分为四组,每组各20只:正常复苏组:复苏成功后1h及早9晚5注射生理盐水1ml/次;拮抗剂组:复苏成功后1h、早9晚5注射拮抗剂0.2ml/只;参附组:复苏成功后1h、早9晚5注射参附注射液2.1ml/kg;拮抗剂+参附组:复苏成功1h、早9晚5予拮抗剂0.2ml/次注射,0.3ml生理盐水冲管后予2.1ml/kg参附注射液注射;另外40只分为两组,假手术组:只进行气管插管及股动静脉插管处理,在操作完成后1h及早9晚5注射生理盐水1ml/次;空白对照组:予生理盐水0.75ml腹腔注射,不予心肺复苏处理,1h后、晨9晚5注射生理盐水1ml/次。对各组大鼠进行生存率评价,复苏成功后3h及24h时间点进行神经功能缺陷评分,HE染色法评估大鼠心脏骤停心肺复苏后病理损伤水平,Western Blot检测NogoA、mTOR、STAT3蛋白表达水平,免疫组化法检测mTOR蛋白的表达。结果:1、成功使用窒息合并冰氯化钾法建立大鼠心脏骤停心肺复苏模型,且所制备的模型稳定,模型的可重复性高。2、在基础生理参数及心脏骤停与复苏参数无统计学差异(p>0.05)的前提下,心脏骤停心肺复苏造模成功后存活大鼠在3h的神经功能缺损较24h明显。在复苏成功后3h时间点,神经功能评分在正常复苏组与参附组相比差异有统计学意义(P=0.001<0.05)、正常复苏组与拮抗剂组相比差异有统计学意义(P=0.023<0.05)、正常复苏组与拮抗剂+参附组相比差异有统计学意义(P=0.001<0.05),在24h时间点,正常复苏组与参附组相比差异有统计学意义(P=0.000<0.05),与拮抗剂组相比差异有统计学意义(P=0.006<0.05),与拮抗剂+参附组相比差异有统计学意义(P=0.000<0.05),可见通过参附注射液及拮抗剂干预后的大鼠的神经功能明显改善,且在24h之内随着时间的延长改善明显加强。3、HE染色结果显示,正常复苏组大鼠的心肌纤维变形,有溶解断裂现象发生,而心肌炎性细胞渗透,间质宽,亮,水肿明显,心肌损伤严重,参附注射液处理可明显减轻心肌损伤。镜下正常复苏组肺泡充血水肿严重,参附组较正常复苏组明显改善。4、Western Blot结果提示,造模成功后3h,与空白对照组相比,正常复苏组NogoA蛋白表达升高(P=0.001<0.05),表明在造模成功3h时大鼠海马组织中NogoA的表达量升高,同期,与正常复苏组相比,拮抗剂+参附组中NogoA蛋白表达明显下降(P=0.000<0.05)。造模成功后24h,与空白对照组相比,正常复苏组NogoA表达升高,(P=0.000<0.05),说明在24h时,海马组织中NogoA的表达量仍高于正常水平。24h其他组与正常复苏组相比,NogoA蛋白表达水平具有显著差异(P均<0.05),说明参附注射液及拮抗剂均可减少心脏骤停心肺复苏后大鼠海马组织中NogoA表达量。随着复苏时间的延长,NogoA在24h正常复苏组的相对表达量较3h降低,其中参附组及拮抗剂+参附组下降更为明显,表明心脏骤停心肺复苏成功后24h内脑缺血缺氧性损伤可使自噬增强,增强的自噬可减轻脑神经损伤,且参附注射液可通过下调自噬相关蛋白NogoA的表达发挥脑保护作用。与造模成功后3h相比,造模成功后24h拮抗剂组、参附组及拮抗剂+参附组中,mTOR的蛋白表达量下降明显(P均<0.05),说明参附注射液通过调控mTOR的表达水平发挥保护作用,另外,在正常复苏组蛋白表达量轻微升高的趋势下,拮抗剂组mTOR表达水平降低显著(P<0.05),表明mTOR可能为NogoA的下游信号分子,受NogoA蛋白水平的影响发挥作用,参附组较正常复苏组下降更为显著,说明参附注射液可通过mTOR相关通路调节介导自噬,mTOR在24h时间点正常复苏组的蛋白表达量较空白对照组及假手术组明显升高,说明心脏骤停/心肺复苏后神经细胞受缺血缺氧性损伤的影响增强自噬,而参附注射液可通过NogoA/mTOR信号通路影响自噬水平,发挥神经保护作用。5、在免疫组化分析mTOR蛋白含量时也可得出,参附组较正常复苏组阳性表达量少,亦可解释参附注射液通过调控mTOR相关自噬通路保护心脏骤停心肺复苏后大鼠神经细胞。结论:本研究证明,在窒息合并冰氯化钾致心脏骤停大鼠模型中,静脉注射参附注射液可有效减轻大鼠的神经损伤,初步证实参附注射液的神经保护作用与调控自噬相关蛋白NogoA、mTOR的表达有关。