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我国菲律宾蛤仔(俗称杂色蛤、花蛤)产量高且富含抗肿瘤、抗氧化、抗高血压和增强免疫力等多种生物活性物质,具有广阔的开发和应用前景。本研究以菲律宾蛤仔为原料,选用酶解、超滤、离子交换和凝胶色谱层析等方法制备菲律宾蛤仔抗肿瘤多肽,并探讨了高纯度多肽的体内抗肿瘤活性,为菲律宾蛤仔多肽类功能食品开发提供理论基础。论文主要研究结果如下:(1)菲律宾蛤仔抗肿瘤多肽的提取:以氨基态氮(ANN)含量和肿瘤细胞A549抑制率为指标,依次经选酶试验、单因素试验和正交试验,确定酶法提取菲律宾蛤仔抗肿瘤多肽的最佳工艺条件是:胃蛋白酶添加量2 000 U/g,料液比(湿样)(w/w)1:1,pH 2.0,酶解温度37℃,酶解时间1.0 h。此条件下,菲律宾蛤仔酶解液的ANN含量为0.1470 g/100mL。当菲律宾蛤仔酶解粗产物浓度为20 mg/mL时,其A549抑制率为99.83%。(2)菲律宾蛤仔抗肿瘤多肽的分离纯化:以最佳酶法提取条件制备菲律宾蛤仔抗肿瘤多肽粗提物,粗提物经截留分子量为5 KDa和10 KDa的超滤膜截留成MWCOⅠ(分子量大于10 KDa)、MWCOⅡ(分子量介于5 KDa和10 KDa之间)和MWCOⅢ(分子量小于5 KDa)3个组分,其中MWCOⅢ抗肿瘤活性最高,IC50为6.88 mg/mL。MWCOⅢ进一步经SP Sephadex C-25离子交换柱分离得到6个组分,其中MWCOⅢ-Ⅳ抗肿瘤活性最高,IC50为6.65 mg/mL。MWCOⅢ-Ⅳ进一步经Sephadex G-25凝胶过滤层析柱,分离得到3个组分,其中MWCOⅢ-Ⅳ-A抗肿瘤活性最高,IC50为4.82 mg/mL。氨基酸组成分析结果表明,MWCOⅢ-Ⅳ-A含有15种氨基酸,其中谷氨酸、亮氨酸和天冬氨酸等酸性氨基酸含量较高,分别占其总氨基酸的25.43%、9.16%和8.51%。(3)菲律宾蛤仔多肽MWCOⅢ体内抗肿瘤活性分析:对超滤得到的高活性MWCOⅢ进行了体内抗肿瘤功效评价。结果表明:高剂量组MWCOⅢ能够明显改善A549荷瘤小鼠生长发育状况,抑制A549荷瘤小鼠瘤体的生长,抑制率达49.01%。低、中、高剂量的MWCOⅢ均能促进脾脏与胸腺的生长,且脾脏与胸腺的生长促进作用大小与MWCOⅢ给药剂量之间具有一定的正相关性。MWCOⅢ能够抑制A549荷瘤小鼠体内VEGF、CD31和BCL-2蛋白的表达,促进A549荷瘤小鼠体内BAX蛋白表达。MWCOⅢ能够促进A549荷瘤小鼠体内IL-2、IFN-γ的分泌。MWCOⅢ能够在体内明显抑制A549荷瘤小鼠瘤体的生长,并增强A549荷瘤小鼠的免疫功能。本文对菲律宾蛤仔抗肿瘤多肽提取、分离纯化及体内外抗肿瘤活性进行了研究,为菲律宾蛤仔多肽功能食品的开发奠定了基础。