【摘 要】
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目的:杨树桑黄Sanghuangporus vaninii属于桑黄孔菌属(Sanghuangporus)的一类珍稀的食药用真菌,桑黄的子实体因受野生产量少、生长周期长等因素制约,使得桑黄子实体的开发和利用受到了限制,因此探究桑黄液体发酵菌丝体代替子实体进行应用具有重要意义。本实验采用生物发酵技术优化桑黄的液体发酵工艺,为桑黄菌丝大规模生产提供技术基础。将发酵后得到的菌丝与不同栽培基质子实体进行化学
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目的:杨树桑黄Sanghuangporus vaninii属于桑黄孔菌属(Sanghuangporus)的一类珍稀的食药用真菌,桑黄的子实体因受野生产量少、生长周期长等因素制约,使得桑黄子实体的开发和利用受到了限制,因此探究桑黄液体发酵菌丝体代替子实体进行应用具有重要意义。本实验采用生物发酵技术优化桑黄的液体发酵工艺,为桑黄菌丝大规模生产提供技术基础。将发酵后得到的菌丝与不同栽培基质子实体进行化学成分及抗氧化活性的比较,以期为桑黄菌丝体代替子实体的应用奠定基础。对桑黄发酵产物多糖抗高尿酸血症的治疗作用及机制进行研究,为桑黄发酵产物的开发与利用提供新的方向。方法:采用单因素考察、Plackett-Burman试验设计法和Box-Behnken design响应面分析法,对桑黄液体发酵培养基及培养条件进行筛选和优化。液体发酵得到的菌丝体与不同栽培基质的子实体依据国家标准进行水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物、粗蛋白质、粗脂肪、粗纤维的含量测定;通过紫外-可见分光光度法、高效液相色谱法(HPLC)测定总多糖、总黄酮、总三萜、麦角甾醇、麦角甾酮含量;根据DPPH·自由基清除率和ABTS+·自由基清除率评价其抗氧化能力。选用雄性ICR小鼠建立高尿酸血症模型,探讨桑黄发酵产物多糖对高尿酸血症小鼠的治疗作用及机制。结果:单因素考察和Plackett-Burman试验法结果表明,影响桑黄胞内多糖产量最显著的因素为碳源(小米)、氮源(豆饼粉)、p H;进一步通过响应面分析法优化最佳工艺为:碳源(小米)37 g/L,氮源(豆饼粉)27 g/L,p H 5.7。水分、总灰分、酸不溶性灰分含量:椴木培养的子实体>木屑培养的子实体>菌丝;浸出物、粗纤维含量:椴木培养子实体>菌丝>木屑培养的子实体;粗蛋白、粗脂肪含量:菌丝>椴木培养的子实体>木屑培养的子实体;DPPH·自由基清除率:椴木培养的子实体>木屑培养的子实体>菌丝;ABTS+·自由基清除清除率:椴木培养的子实体>菌丝>木屑培养的子实体。药理实验结果表明,桑黄发酵产物多糖各剂量组均可降低小鼠血清UA、CRE、IL-6、TNF-α含量,桑黄发酵产物多糖低剂量组可降低XOD含量;肝、肾组织病理学切片观察显示,桑黄发酵产物多糖各剂量组肝组织中炎性细胞、肾组织中嗜酸性物质均减少;桑黄发酵产物多糖各剂量组的肾脏中HMGB1、RAGE、NF-κB p65蛋白表达降低。结论:优化后的发酵工艺,培养条件稳定,重复性良好,成本低,可为今后大规模生产桑黄菌丝体提供理论基础;在营养成分含量上菌丝体大于子实体,提示在食品领域上菌丝体有望代替子实体被开发利用;在总多糖和麦角甾醇的含量上菌丝高于子实体,建议菌丝可在抗肿瘤、抗炎、提高人体免疫力等多方面代替子实体进行开发与应用;药理实验证明桑黄发酵产物多糖具有降尿酸作用,其作用机制是通过降低肝脏次黄嘌呤氧化酶(XOD),减少尿酸的生成,同时下调细胞信号通路HMGB1/RAGE/NF-κb的蛋白表达水平,抑制炎性因子释放,修复高尿酸引起的肝脏和肾脏损伤,使其恢复正常功能。
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