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实验背景及目的：糖尿病（Diabetes mellitus，DM）是由遗传、环境等多因素相互作用而引起的全身性疾病，它对心血管系统的危害是十分严重的。糖基化终产物（Advanced glycation end products，AGEs）在糖尿病及其并发症的发生发展中起到了极大的影响作用。AGEs与糖尿病病人患病程度明显相关，阻止AGEs生成可不同程度减少或减轻糖尿病及其并发症的发展。Notch信号通路与某些器官和疾病的发生有密切关联，γ-分泌酶抑制剂（DAPT）是Notch信号通路特异性阻断剂。研究表明，Notch信号通路参与血管生成等重要的生理过程。本实验旨在探讨Notch信号通路特异性阻断剂γ-分泌酶抑制剂（DAPT）对AGEs作用下的心肌微血管内皮细胞（Cardiac microvascular endothelialcells, CMECs）的影响及Notch信号通路在其中的作用机制。实验方法：第一部分：培养大鼠CMECs及制备AGEs-BSA。无菌环境中取大鼠心室，利用酶消化法分离出CMECs，离心并用DMEM（含20%胎牛血清FCS）培养液重悬，放置于37℃，5%CO2培养箱中，观察细胞形态。将BSA与葡萄糖在避光条件下、恒温37℃孵育80天，并配制出BSA（采用相同条件）为对照组。制备成功后，采用荧光分光光度仪对其进行鉴定并计算蛋白含量。第二部分：DAPT对AGEs作用下CMECs的影响。取上述培养的第2代细胞，以不同浓度DAPT（μmol/L:0、0.25、0.5、1.0、5.0、10.0）干预200mg/L AGEs-BSA作用下的CMECs1天，或者以DAPT（5μmol/L）干预不同时间（0h、24h、48h、72h、96h）后，采用MTT法检测细胞增殖能力，用Transwell法检测细胞迁移能力，用毛细血管管腔结构形成实验观察DAPT对细胞血管新生的影响。第三部分：AGEs通过Notch信号通路对CMECs的影响及机制探讨。取体外培养的第2代细胞，实验分为BSA组、AGEs-BSA组、（AGEs-BSA+DAPT）组，分别作用1天、2天、3天、4天,采用MTT法检测细胞增殖能力，毛细血管管腔结构形成实验检测对细胞血管新生的影响，TUNEL法检测细胞凋亡，Western blot检测Notch的蛋白表达。实验结果：1.体外成功分离并培养出CMECs，经鉴定确定为实验所要用的细胞。2.成功制备出AGEs-BSA，经鉴定AGEs含量为98.6kU/g，对照组含量为2.2kU/g。3. DAPT能显著抑制AGEs作用下的心肌微血管内皮细胞的存活，同时浓度越高、时间越长，其抑制效果越明显，差异具有统计学意义（P<0.05）。4.与其余两组相比，AGEs-BSA组吸光度值在作用1天、2天、3天后明显升高（P<0.01），CMECs管腔结构的长度明显增加，Notch蛋白表达显著增加（P<0.01）；而在作用4天后，AGEs-BSA组CMECs管腔结构的长度及Notch蛋白表达显著降低（P<0.01），差异有统计学意义。与AGEs-BSA组相比，（AGEs-BSA+DAPT）组吸光度值及CMECs管腔结构的长度明显下降（P<0.05），凋亡指数明显上升（P<0.01），差异具有统计学意义。结论：1. DAPT通过阻断Notch信号通路，能抑制AGEs作用下的心肌微血管内皮细胞的增殖、迁移、血管新生，并且与浓度、时间有一定相关性。2. AGEs在作用早期，显著增强了CMECs的增殖和管腔结构形成能力，其作用机制可能与激活Notch信号通路有关。3. AGEs作用晚期，细胞凋亡现象明显、管腔结构出现崩解，可能与Notch表达下调相关。