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桉树(Eucalyptusspp.)是世界三大速生造林树种之一,具有重要的经济价值。桉树焦枯病(Cylindrocladium leaf blight)是桉树苗木生产极具毁灭性病害之一。目前对桉树焦枯病的防治主要采用化学防治方法,但其防治效果仍需较大的提高,且也潜藏农药残留、环境污染和抗药性等安全隐患。因此,从植物的抗病防御机制入手,提高寄主抗病性是桉树焦枯病防治切实可行的重要途径。茉莉酸类物质(JAs)是病害植物启动抗病防御机制的重要化学信号分子之一,且本课题组前期利用 SSH 技术构建巨赤桉9224(Eucalyptus grandis×E.urophylla 9224)抗焦枯病的cDNA正向差减文库中发现了上调表达的茉莉酸结构域mRNA。有鉴于此,本文以感病种系“巨桉3号”(Eucalyptus grandis 3)和中抗种系“巨尾桉广9”(E.grandis3×E.urohylla guang9)为材料,采用蛋白质组学技术对焦枯病菌胁迫下桉树的响应情况和MeJA诱导桉树对焦枯病抗性的影响进行研究,旨在揭示焦枯病菌胁迫下和茉莉酸诱导桉树对焦枯病抗性的关键蛋白,为桉树焦枯病防治工作奠定基础。主要研究结果如下:1.TCA/丙酮沉淀/苯酚抽提法是桉树叶片蛋白质样品制备的最优方法。2.裂解缓冲液(7mol.L-1 尿素、2mol.L1 硫脲、4%(W/V)CHAPS、60mmol.L-1 DTT、0.5%(V/V)IPG Buffer)适用于桉树叶片蛋白的裂解。3.对于18cm、pH4-7的线性胶条,当上样量为5Oμg/IPG并采用银染时,可得到质量较高的2-DE图谱。4.对供试的2个抗病和感病材料在焦枯病菌胁迫24h后其叶片的差异表达蛋白进行质谱鉴定分析,最终共鉴定出20个蛋白点,对这些差异蛋白进行功能归类分析表明:除了 3个EST对应蛋白、3个未知功能蛋白和2个预测蛋白外,这些蛋白主要参与了桉树抗病防御、信号转导与转录、蛋白的合成与修饰、物质和能量代谢等多个生理过程。分析发现TIR-NBS-LRR类抗病蛋白在感病种系“巨桉3号”叶片中显著上调表达,而中抗种系“巨尾桉广9”叶片中并未见该蛋白的明显表达,表明不同桉树种系在焦枯病菌胁迫下其自主防御途径可能存在差异。5.对MeJA诱导下供试的2个抗病和感病材料对焦枯病菌防御过程中其叶片的差异表达蛋白进行质谱鉴定分析,最终共鉴定出15蛋白点,对这些差异蛋白进行功能归类分析表明:除了3个未知功能蛋白和2个预测蛋白外,这些蛋白主要参与了桉树抗病防御反应、物质和能量代谢、蛋白合成及其他生化过程如tRNA修饰和DNA修复等多个生理过程。分析发现:在外源MeJA诱导桉树抗焦枯病过程中,多数上调表达差异蛋白如ADR1-L1抗病蛋白、RP、tRNA-IPT、3-甲基腺嘌呤DNA糖苷酶和DUF蛋白等在“巨桉3号”中的上调趋势明显大于“巨尾桉广9”中的上调趋势,表明外源MeJA对感病种系抗焦枯病的诱导效果较明显。此外,MeJA介导桉树抗焦枯病过程中的差异表达蛋白与焦枯病菌胁迫下桉树的差异表达蛋白存在较大的差异,说明焦枯病菌胁迫下桉树的自主防御途径与外源MeJA介导的抗病途径可能存在差异。