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第一部分 手术创伤对大鼠术后空间学习记忆能力的影响
目的:动态观察手术创伤对大鼠空间学习记忆能力的影响。
方法:SD大鼠98只,雌雄各半,体重300-350g,随机分为3组:正常对照组(A组,n=14),麻醉组(B组,n=42),手术组(C组,n=42),B、C组各进一步分为3个亚组,分别为麻醉或手术后1d、3d、7d组,即B1、B3、B7亚组和C1、C3、C7亚组,每亚组14只。B组大鼠仪腹腔注射芬太尼0.2mg/kg、氟哌利多5mg/kg麻醉,不行手术。C组大鼠麻醉(同B组)后实施脾切除手术。Y-型电迷宫测试大鼠的学习记忆能力,记录能够引起各组大鼠在10s内跑动时的刺激电压大小和达到学会标准时累计学习的次数。学习记忆测试后,各组14只大鼠中有7只用作直接取海马,进行实验的第二部分;有6只大鼠用作灌注、取材,行免疫组化实验,进行实验的第三、四部分。
结果:C1组的刺激电压为(53±83)V,明显高于其余各组(P<0.01)。C1、C3组大鼠达到学会标准时累计学习的次数分别为(67±26)和(60±18)次,较其余各组显著升高(P<0.01),C7组大鼠学习的次数与A组及C组相比差异无显著性。B组大鼠上述指标与A组相似。
结论:手术创伤可暂时损害大鼠的空间学习记忆能力。
第二部分手术创伤后大鼠海马TNF-αmRNA、IL-1βmRNA及其蛋白表达的变化
目的:观察手术创伤后大鼠海马内TNF-αmRNA、IL-1βmRNA及蛋白表达的变化。方法:上述各组14只大鼠行为学测试结束,其中每组7只大鼠麻醉后,断头处死,冰上取海马,-80℃低温冰箱保存,用RT-PCR检测海马TNF-αmRNA和IL-1βmRNA的表达(n=4),western-blot测定相应蛋白表达(n=3)。
结果:C1组大鼠海马TNF-αmRNA表达较A组及B组显著增多(P<0.05)。C1、C3组海马内IL-1βmRNA增多(P<0.05)。而蛋白水平只有C1组IL-1β表达增多(P<0.05)。各组TNF-α的表达各组间差异无显著性。
结论:手术创伤可短暂引起海马TNF-αmRNA、IL-1βmRNA和IL-1β蛋白表达增多。
第三部分手术创伤对大鼠海马CA1区GFAP和S100蛋白表达的影响
目的:动态观察手术创伤对大鼠海马内GFAP、S100蛋白表达的影响。
方法:上述各组14只大鼠行为学测试结束,其中6只大鼠麻醉后,灌注取材,用免疫组织化学方法检测海马内GFAP和S-100蛋白的表达变化。
结果:C1组大鼠海马CA1区GFAP、S-100表达增多。
结论:手术创伤可引起短时程星形胶质细胞的活化。
第四部分手术创伤对大鼠海马CA1区Bcl-2和Bax表达的影响
目的:观察手术创伤对大鼠海马内Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。
方法:上述各组14只大鼠行为学测试结束,其中每组6只大鼠麻醉后,灌注取材(同第三部分),免疫组织化学方法观察海马内Bcl-2和Bax蛋白的表达变化。
结果:A、B组海马CA1区无Bax、Bcl-2表达,C组中各亚组海马CA1区Bax、Bcl-2的表达均增多,镜下计数计算Bax/Bcl-2比值,C1组的比值增高(P<0.05)。
结论:手术创伤后大鼠海马内Bax和Bcl-2表达均增多,且术后1d时海马内Bax和Bcl-2的表达有损害倾向。