【摘 要】
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本论文对长白山地区药用植物喜冬草（Chimaphila japonica Miq.）醇提物的乙酸乙酯萃取层进行化学成分及其抗肿瘤活性研究。杜鹃花科（Ericaceae）喜冬草属（Chimaphila）植物在全世界约有5种,广泛分布在中国、日本、韩国、俄罗斯、欧洲、北美和中美洲。我国有3种,分别为喜冬草（C.japonica）,伞形喜冬草（C.umbellata（L.）W.Barton）和川西喜冬草
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本论文对长白山地区药用植物喜冬草（Chimaphila japonica Miq.）醇提物的乙酸乙酯萃取层进行化学成分及其抗肿瘤活性研究。杜鹃花科（Ericaceae）喜冬草属（Chimaphila）植物在全世界约有5种,广泛分布在中国、日本、韩国、俄罗斯、欧洲、北美和中美洲。我国有3种,分别为喜冬草（C.japonica）,伞形喜冬草（C.umbellata（L.）W.Barton）和川西喜冬草（C.monticola H.Andr.）。有报道称,喜冬草提取物具有抗氧化、抗肿瘤、抑菌、抗炎等药理活性,同时具有利尿、收敛,镇痛作用,临床上应用其作为利尿及尿道消炎剂,可治疗各种水肿。目前国内外对喜冬草药材活性成分的研究相对较少,对于喜冬草属的研究主要集中于伞形喜冬草（C.umbellata）,其主要含有萜类、甾醇类、黄酮类以及醌类等多种类型化合物,同时具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化等多种药理活性。因此有必要对喜冬草进行深入的化学成分和生物活性研究,对长白山地区优势资源的开发利用具有十分重要的意义。本课题组在针对长白山地区天然药物中筛选肿瘤细胞毒活性的药用植物资源时,发现喜冬草90%乙醇提取物对三种常见的肿瘤细胞株（人肺癌细胞A549,人宫颈癌细胞He La和人肝癌细胞SK-Hep1）具有显著的抑制作用,并明确了乙酸乙酯萃取层为主要活性部位之一。本实验利用正相硅胶柱层析、反相硅胶柱层析、葡聚糖凝胶柱层析,重结晶等多种分离技术,对喜冬草的乙酸乙酯萃取层进行了系统分离与纯化,并通过所得单体化合物的理化性质和波谱分析(1H-NMR与13C-NMR)以及相关文献的佐证确定了化合物的结构。从喜冬草的乙酸乙酯层共分离得到18个单体化合物,分别为:3β-taraxerol（1）,chimaphilin（2）,6-hydroxy2,7-dimethyl-1,4-naphtha quinone（3）,β-sitosterol（4）,pyrolin（5）,ursolic acid（6）,eupatoric acid（7）,α-amaryin（8）,β-amaryin（9）,3β,27-dihydroxy-lup-12 ene（10）,oleanolicacid（11）,kaempferol（12）,quercetin（13）,kaempferol-3-O-α-L-5’’-acetyl-arabinofuranoside（14）,gallic acid（15）,corosolic acid（16）,japonica acid（17）和α-amyrenone（18）。所分得的化合物包括9个三萜类（1,6–11,16和18）,3个黄酮类（12–14）,2个诺酮类（2和3）,2个酚类（5和15）,1个甾体类（4）和1个脂肪酸类化合物（17）,说明三萜类化合物是喜冬草乙酸乙酯层的主要化学成分。其中化合物3、5、7、9、10、11、12、13、15、17和18为首次从该植物中分离得到。利用MTT法测定了喜冬草乙酸乙酯萃取层所分离的化合物对A549、He La和SK-Hep1细胞的体外肿瘤细胞毒生物活性。实验结果显示,在30μM的给药浓度下,化合物2–5、7、10、11和16能够抑制人肺癌细胞A549的生长;化合物3、5、10、11和16能够抑制人宫颈癌细胞He La的生长;化合物1–3、5–8、10、11和16能够抑制人肝癌细胞SK-Hep1的生长。综上,化合物2、3、5、10、11和16对三种癌细胞均有明显的抑制作用。在人肺癌细胞（A549）中,化合物2、5和11的肿瘤细胞毒活性尤为显著,其IC50值分别为1.25±1.14、1.84±1.23和2.64±1.08μM;在人宫颈癌细胞（He La）中,化合物2和4的肿瘤细胞毒活性尤为显著,其IC50值分别为1.21±0.47和1.96±0.22μM;在人肝癌细胞（SK-Hep1）中,化合物2、4和5的肿瘤细胞毒活性尤为显著,其IC50值分别为2.56±0.63、1.52±0.32和1.18±0.74μM。本实验不仅丰富了对喜冬草化学成分的认识,并通过药理活性筛选阐明了其肿瘤细胞毒活性的物质基础,为其进一步研究和开发利用提供了科学依据。
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