【摘 要】
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目的:PDIA6即蛋白质异构酶家族A成员6,蛋白质异构酶家族是一种硫醇-二硫键氧化还原酶。该家族主要在内质网中发挥生物学效应,其最主要的功能是能够在内质网中催化新生肽键的氧化折叠、内质网相关蛋白的降解,其次在钙稳态、蛋白质转运、病毒入侵和抗原呈递中起重要作用。此前的研究显示,PDIA6在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）中,影响细胞凋亡、细胞增殖、细胞
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目的:PDIA6即蛋白质异构酶家族A成员6,蛋白质异构酶家族是一种硫醇-二硫键氧化还原酶。该家族主要在内质网中发挥生物学效应,其最主要的功能是能够在内质网中催化新生肽键的氧化折叠、内质网相关蛋白的降解,其次在钙稳态、蛋白质转运、病毒入侵和抗原呈递中起重要作用。此前的研究显示,PDIA6在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）中,影响细胞凋亡、细胞增殖、细胞周期、细胞自噬等。在本研究中,我们探究了PDIA6在NSCLC转移中的作用以及对其分子机制进行了初步探索。方法:（1）通过Western Blot实验检测人永生化支气管上皮细胞HBE和A549、CCL-157、HTB-171、Anip-973、NCI-H520五种肺癌细胞的PDIA6表达水平,筛选出适合研究PDIA6对NSCLC细胞转移功能影响的两种细胞来构建PDIA6过表达与敲降细胞系。（2）用Western Blot方法检测过表达及敲降PDIA6后,EMT（epithelial-mesenchymal transition）相关分子标志物、EMT上游转录因子及基质金属蛋白酶家族相关蛋白MMPs表达的变化。（3）通过免疫荧光检测将PDIA6过表达、敲降后,EMT（epithelial-mesenchymal transition）相关的分子标志物表达的变化。（4）通过细胞划痕实验检测将PDIA6过表达、敲降后,细胞迁移能力的变化;通过Transwell实验检测将PDIA6过表达及敲降后,细胞迁移和侵袭能力的变化。（5）通过尾静脉注射NSCLC细胞构建裸鼠肺转移模型,检测PDIA6在体内对NSCLC细胞转移的影响。结果:在本研究中,我们通过Western Blot的方法筛选出A549细胞及NCI-H520细胞来构建PDIA6的过表达与敲降细胞系。同时,在体外实验中,PDIA6的上调促进了NSCLC细胞的EMT过程。在分子水平上PDIA6调控了EMT相关标志物的表达极其上游转录因子的表达。同时PDIA6也影响了EGFR、ERK的表达。使用EGFR、ERK的抑制剂后,NSCLC细胞的转移能力及EMT相关标志物的蛋白表达水平发生改变。在体内试验中,通过尾静脉注射NSCLC细胞来构建了裸鼠肺转移模型,结果显示PDIA6促进了NSCLC在裸鼠体内的转移。结论:PDIA6基因促进NSCLC细胞的转移及侵袭,可能通过EGFR/ERK信号通路参与调控该生物学行为。
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