【摘 要】
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背景:卵巢储备功能减退（diminished ovarian reserve,DOR）指卵母细胞数量和/或质量下降,是当今女性不孕不育的主要原因之一。在体外受精-胚胎移植过程中,DOR与卵巢刺激低反应、临床妊娠率减低和流产率增高有关。近年来,DOR患病率逐年上升,成为辅助生殖的主要难题。在卵母细胞的发育和成熟过程中,脂肪酸和其他代谢物（如:胆固醇、类固醇激素和氨基酸）提供营养物质和调节信号。本研究
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背景:卵巢储备功能减退（diminished ovarian reserve,DOR）指卵母细胞数量和/或质量下降,是当今女性不孕不育的主要原因之一。在体外受精-胚胎移植过程中,DOR与卵巢刺激低反应、临床妊娠率减低和流产率增高有关。近年来,DOR患病率逐年上升,成为辅助生殖的主要难题。在卵母细胞的发育和成熟过程中,脂肪酸和其他代谢物（如:胆固醇、类固醇激素和氨基酸）提供营养物质和调节信号。本研究探讨颗粒细胞（granulosa cells,GCs）中脂肪酸和其他代谢物变化是否为DOR的发病机制。方法:首先,收集70名卵巢储备功能正常（normal ovarian reserve,NOR）患者和70名DOR患者临床资料和GCs。利用液相色谱-串联质谱（liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）分析DOR患者GCs中脂肪酸和其他代谢物（如:胆固醇、类固醇激素和氨基酸）变化。然后,脂肪酸作为主要的能量来源。利用气相色谱-质谱（gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS）精确定量DOR患者GCs中脂肪酸变化。此外,还通过线粒体膜电位、ATP生成、DNA损伤和细胞凋亡等分析脂肪酸变化对GCs凋亡和卵母细胞发育的影响。最后,实时荧光定量PCR检测脂肪酸β氧化和DNA修复通路相关基因的表达。结果:与NOR患者相比,DOR患者窦卵泡数、基础抗苗勒管激素水平显著降低,基础卵泡刺激素水平显著升高（P＜0.05）。DOR患者优质胚胎率显著降低（P＜0.05）。LC-MS/MS分析结果显示,DOR患者GCs中脂肪酸（如:油酸、二十碳五烯酸和花生四烯酸）、胆固醇（如:粪甾酮）、类固醇激素（如:11A-乙酰氧孕酮、羟孕酮和孕酮）和氨基酸（如:赖氨酸、精氨酸和丝氨酸）显著减少（P＜0.05）。GC-MS分析结果显示,15种脂肪酸在DOR患者GCs中显著减少（P＜0.05）。此外,DOR患者GCs中线粒体膜电位（1.74±0.13%vs 1.02±0.15%）和ATP含量（39.07±12.89%vs 23.21±13.69%）明显低于NOR患者（P＜0.05）。β氧化基因（HADHA、ACSL）和DNA修复基因（PRKDC、RAD50）在DOR患者中显著下调（P＜0.05）。与NOR患者相比,DOR患者GCs中DNA损伤（0.31±0.03%vs 0.87±0.07%）和凋亡率（6.43±2.11%vs 48.06±6.72%）显著增加（P＜0.05）。结论:脂肪酸和其他代谢物（如:胆固醇、类固醇激素和氨基酸）与DOR的发生相关。其中,脂肪酸减少伴随ATP生成减少和DNA损伤导致GCs凋亡可能是DOR的发病机制。
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