【摘 要】
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目的:探讨甘露醇与神经干细胞增殖之间的关系及其可能机制,以期为甘露醇临床安全使用提供新的理论依据。方法:1)体外分离并培养小鼠原代神经干细胞（Neural stem cells,NSCs）,免疫荧光法检测培养的细胞中Nestin和SOX2蛋白表达情况;用免疫荧光法分别检测星形胶质细胞、神经元及少突胶质细胞的特异性标志蛋白GFAP、MAP2和Olig2的表达。2)用CCK8法检测不同浓度甘露醇干预后
【基金项目】
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基金项目:国家自然科学基金（82060245）; 基金项目:中国教育部（2020-39）; 贵州省科技计划项目（[2020]4Y149、[2019]5661）
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目的:探讨甘露醇与神经干细胞增殖之间的关系及其可能机制,以期为甘露醇临床安全使用提供新的理论依据。方法:1)体外分离并培养小鼠原代神经干细胞（Neural stem cells,NSCs）,免疫荧光法检测培养的细胞中Nestin和SOX2蛋白表达情况;用免疫荧光法分别检测星形胶质细胞、神经元及少突胶质细胞的特异性标志蛋白GFAP、MAP2和Olig2的表达。2)用CCK8法检测不同浓度甘露醇干预后NSCs的活力,筛选合适的甘露醇的剂量,进行下一步实验。3)将NSCs分为Control组和50mmol/L甘露醇组,干预48h,用CCK8法检测NSCs增殖活力;倒置相差显微镜观察NSCs成球生长的数目并测量神经球的直径大小;免疫荧光检测Ki67+、Nestin+和AQP4+、Nestin+细胞数量占所有NSCs的比例。以蛋白印迹法（Western Blot,WB）检测AQP4、p-P38、p-JNK、p-ERK1/2蛋白表达水平。3)根据培养基中加入甘露醇、P38抑制剂（SB203580）的情况,将NSCs分成Control组、50mmol/L甘露醇组、50mmol/L甘露醇+SB203580（10μmol/L）组,干预48h,同上方法检测NSCs增殖活力、成球生长的数目及神经球直径大小、Ki67+和Nestin+细胞数量占所有NSCs的比例、AQP4 m RNA和蛋白水平及p-P38蛋白表达水平。结果:1)经细胞形态学观察、免疫染色检测证实培养的细胞具良好的干性及多分化潜力,鉴定为神经干细胞。2)与Control组相比,50mmol/L甘露醇组NSCs增殖活性明显下降（20%,p＜0.05）、神经干细胞球数目减少（65%,p＜0.01）、直径减小（33%,p＜0.01）、Ki67+和Nestin+细胞和AQP4+和Nestin+细胞数量占所有NSCs比例显著下降（74%,p＜0.01;37%,p＜0.01）、NSCs中AQP4 m RNA及蛋白表达均降低（65%,p＜0.01;36%,p＜0.01）、p-P38蛋白表达水平升高（26%,p＜0.05）。3)与50mmol/L甘露醇组相比,50mmol/L甘露醇+SB203580（10μmol/L）组中的神经干细胞球数目增加（42%,p＜0.05）、直径增大（15%,p＜0.05）、Ki67+和Nestin+细胞数量占所有NSCs比例增加（44%,p＜0.05）和p-P38蛋白表达水平下降（24%,p＜0.01）。结论:1)甘露醇可抑制神经干细胞增殖;2)甘露醇可能是通过激活p38 MAPK信号通路抑制神经干细胞增殖。
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