【摘 要】
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水稻是重要的粮食作物,稻瘟病是影响水稻产量的三大病害之首,严重影响水稻产量。研究稻瘟病抗性基因,进行抗病育种是目前防治稻瘟病最经济有效的方法。由于稻瘟病菌种的变异和多样性,抗性品种在种植几年后往往会失去对稻瘟病的抗性,因此挖掘新的抗性基因至关重要。稻瘟病新抗性基因Pi39来源于云南当地品种Q15,经抗谱检测具有广谱抗性,前期已经构建了Pi39的物理图谱,并构建了10个候选基因的功能互补载体,同时进
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水稻是重要的粮食作物,稻瘟病是影响水稻产量的三大病害之首,严重影响水稻产量。研究稻瘟病抗性基因,进行抗病育种是目前防治稻瘟病最经济有效的方法。由于稻瘟病菌种的变异和多样性,抗性品种在种植几年后往往会失去对稻瘟病的抗性,因此挖掘新的抗性基因至关重要。稻瘟病新抗性基因Pi39来源于云南当地品种Q15,经抗谱检测具有广谱抗性,前期已经构建了Pi39的物理图谱,并构建了10个候选基因的功能互补载体,同时进行遗传转化,得到转基因植株,本研究主要是克隆了另2个候选基因并进行遗传转化,然后对所有候选基因的转基因植株进行了分子鉴定和稻瘟病抗性鉴定,主要内容如下:(1)利用长片段PCR扩增和平末端连接的方法,构建了1300-Pi39C和1300-Pi39E功能互补载体,并进行水稻遗传转化,得到转基因植株,通过阳性鉴定获得转基因阳性植株,其中Pi39C已获得18株转基因阳性苗,Pi39E已获得44株转基因阳性苗。(2)对12个候选基因的功能互补的转基因T1代植株进行阳性鉴定,得到阳性苗,分别进行离体接种和活体接种,观察表型,筛选出候选基因Pi39E1即为抗性基因Pi39。(3)构建Pi39E1的RNAi载体,并进行水稻Q15的遗传转化,得到转基因植株,目前在遗传转化的分化阶段,后续将得到干涉载体的转基因植株,为后续进行稻瘟病抗性鉴定提供材料,同时也能进一步验证Pi39的抗性功能。(4)对日本晴和Q15进行稻瘟病生理小种007的离体接种,在接种后0、12、24、48 h时间点分别混合采样,提取RNA,对Pi39E1表达量进行分析。结果显示:Q15中Pi39E1的表达量明显高于日本晴,表明Pi39E1在水稻Q15对稻瘟病防御机制中发挥作用。(5)构建pM999-Pi39E1-GFP瞬时表达载体,为明确Pi39E1蛋白表达的部位和后续筛选互作蛋白奠定基础。
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