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禽类致病性大肠杆菌(Avain pathogenic Escherichia coli;APEC)的病原体会引起大多数的禽类感染大肠杆菌病。尽管对禽类致病性大肠杆菌病已经有一个多世纪的认识,但这种病仍然是影响全世界家禽业的主要地方性疾病之一。致禽肾脏、肠道病变大肠杆菌能使雏鸡肾脏肿大甚至出血,这在大肠杆菌的临床症状上是极其少见的,并且该菌对青、链霉素和庆大霉素有很强的耐药性,研发新型有效的疫苗对预防该病有着很重要的意义。随着耐药菌株和多重耐药株的产生,抗生素的效果也不如以前理想,灭活苗有较好的保护效果但存在血清型特异性的缺点,因此新型疫苗的研发逐渐成为科研工作者关注的热点。菌影(bacterial ghost,BG)是一种保留了细菌表面完整的形态结构和抗原决定簇,但却不含有核酸等物质的细菌空壳,具有很好的免疫原性和佐剂功能。本实验旨在制备高裂解效率的致禽肾脏、肠道病变大肠杆菌菌影,构建重组温控双裂解表达质粒,其方法为采用融合PCR的方法,通过15个柔性氨基酸linker将噬菌体中金黄色葡萄球菌基因组的核酸酶A基因(SN)和Φ174的裂解蛋白E基因串联,插入温控表达质粒pBV220。PCR扩增其温控双基因裂解表达系统后插入穿梭质粒pBA1100,构建重组穿梭质粒pBA1100-DLS-ES,并将构建好的重组穿梭质粒电转化致禽肾脏、肠道病变大肠杆菌中,低温集菌升温诱导制备菌影。结果表明,裂解效率可高达99.9999%,电镜检测显示细菌内容物被排出而保存了完整的细菌形态,成功制备了致禽肾脏、肠道病变大肠杆菌菌影,为新型疫苗的制备提供依据。通过动物试验对制备的致禽肾脏、肠道病变大肠杆菌菌影疫苗进行免疫保护效果研究。将健康的雏鸡,随机的分成4组,皮下分别接种用不同方式制备的疫苗进行免疫:甲醛灭活组,单裂解菌影苗免疫组和双裂解菌影苗免疫组,对照组。每组实验动物注射剂量都为0.2mL(含菌量约为1*109CFU/mL),对照组注射等体积(0.2mL)生理盐水,一免两周后加强免疫一次。二免后两周用致禽肾脏、肠道病变大肠杆菌7.3X107CFU/只的剂量进行肌肉注射攻毒,通过保护率和血清抗体动态检测等来进行免疫保护效果的研究。结果表明,菌影疫苗的免疫保护作用明显优于甲醛灭活苗组。本研究为耐药大肠杆菌病的预防和治疗提供了一种新技术和新工具。