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研究背景：细胞凋亡与角膜移植免疫关系密切，成为近年来研究的新热点。一方面，角膜组织高表达FasL，诱导角膜移植物中Fas阳性淋巴细胞凋亡，提高角膜移植成功率；另一方面，Fas/FasL相互作用诱导的角膜移植物细胞凋亡与急性免疫排斥反应的发生密切相关。其具体机制尚不明确。对该方面的深入研究有利于进一步阐明角膜移植排斥反应的免疫学发生机制，并可从中探索防治角膜移植免疫排斥反应的新途径。 IL—1是参与角膜移植免疫排斥反应发生的关键因子，研究表明，IL—1与Fas/FasL介导的细胞凋亡关系密切。IL-1ra作为一种新型免疫抑制剂可特异性阻断IL—1的生物学活性发挥免疫抑制作用。本实验通过建立大鼠穿透性角膜移植模型，研究IL-1ra对角膜移植物Fas/FasL介导的细胞凋亡的影响，探讨其与角膜移植免疫排斥反应的关系。 目的：1、检测正常大鼠角膜细胞凋亡及其调节蛋白Fas/FasL表达部位、强度。2、通过检测急性排斥期大鼠角膜移植物细胞凋亡及调节蛋白Fas/FasL表达的变化，分析其与角膜移植急性免疫排斥反应之间的关系。3、对比观察IL-1ra、CsA抑制角膜移植免疫排斥反应的效果及其对角膜移植物细胞凋亡、Fas/FasL蛋白表达的影响，探讨其作用机理。 方法和结果： 1、正常大鼠角膜细胞凋亡及其调节蛋白Fas/FasL的表达。 取正常Wistar大鼠角膜，制作石蜡切片：①HE染色光镜下观察角膜组织形态学特征；②TUNEL法检测细胞凋亡；③免疫组织化学染色(SABC法)检测凋亡调节蛋白Fas/FasL的表达。对细胞凋亡及免疫组织化学染色结果进行全自动图像分析处理。制作电镜标本，透射电镜观察正常角膜细胞超微结构特征。结果:①TUNEL检测结果表明:正常大鼠角膜上皮存在少量细胞凋亡，而在基质及内皮层均未见明显阳性染色。②Fas蛋白主要表达于正常角膜上皮表层及内皮细胞层，在基质层亦轻度表达;FasL蛋白主要表达于上皮表层及内皮细胞层，而在基质层无表达。③正常角膜电镜标本未发现明显细胞凋亡特征。 2、IL一lra对急性排斥期大鼠角膜移植物细胞凋亡及调节蛋白Fas邝asL表达的影响。 建立大鼠同种异体穿透性角膜移植模型，设生理盐水对照组、CsA治疗组、IL一lra治疗组。术后观察排斥反应指数(班)的动态变化。各移植组均于急性排斥期随机取角膜植片，制作石蜡切片:①HE染色，光镜下观察植片病理学变化:②TUNEL法检测细胞凋亡;③免疫组织化学染色(SABC法)检测凋亡调节蛋白Fa好asL的表达。对细胞凋亡及免疫组织化学染色结果进行全自动图像分析处理，结果以PU值表示，并进行统计学分析。每一标本按植片伤口周围及植片中央两个区域进行观察。取已经发生排斥反应的植片，制作电镜标本，透射电镜观察植片细胞超微结构改变。结果:①IL一lra治疗组角膜植片生存时间明显延长;②急性排斥期各移植组角膜植片全层细胞凋亡及Fas压asL蛋白表达增高，以植片上皮及浅层基质更为明显，且植片伤口周围增高显著;两治疗组角膜植片细胞凋亡及Fa好asL蛋白表达均低于生理盐水组，且IL一lra治疗组角膜植片细胞凋亡及Fas邝asL蛋白表达低于CsA治疗组;③己发生排斥反应的角膜植片超微结构改变主要表现为细胞凋亡和细胞坏死共存的特征。 结论:1、正常大鼠角膜存在着细胞凋亡及Fas用asL蛋白的表达。本实验为进行角膜细胞凋亡的实验研究奠定基础。2、Fa好asL系统及其介导的细胞凋亡参与角膜移植急性免疫排斥反应的发生。3、CTL通过细胞凋亡途径诱导移植物细胞损伤是免疫排斥反应发生的主要因素之一。4、CsA和IL一lra均可通过影响角膜植片细胞凋亡及Fas邝asL蛋白的表达发挥免疫抑制作用，且IL一lra免疫抑制作用明显优于CsA。