自拟中药复方对骨髓抑制小鼠造血及免疫功能的影响研究

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目的:为研制出一种高效低成本的中草药免疫增强剂,并探讨其组方的合理有效性,从生物学、血液学、组织学、免疫学角度,研究其对小鼠的造血功能和免疫功能的影响,为免疫增强剂的开发和应用提供参考。方法:(1)取20只6-8周龄、18-22g的清洁级昆明小鼠,其中10只小鼠(♀♂各半)用于建立小鼠骨髓抑制模型,每日上午9:00按80mg/kg腹腔注射环磷酰胺,连用3d;另10只小鼠为健康对照,腹腔注射等量生理盐水,其余处理与模型小鼠一致。末次注射后24h,采用摘除小鼠眼球方法取血0.3mL EDTA-K2抗凝用于测定血液生理指标,并剖解取脾脏、胸腺测定脏器系数,评价建立小鼠骨髓抑制的方法。(2)取130只6-8周龄、18-22g的清洁级昆明小鼠,按照上述方法复制骨髓抑制小鼠模型,并从中选取100只精神、体况接近的小鼠,并按性别、体重平均分为5组(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、V组),每组20只(♀♂各半);另取20只健康小鼠(♀♂各半)为Ⅵ组。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组用中药复方灌胃,剂量(相当于生药含量)分别为:20g/kg、10g/kg、5g/kg;Ⅳ组用黄芪多糖,按66mg/kg灌胃;V组为模型对照组、Ⅵ组为健康对照组,用蒸馏水。于每日上午9:00,将制备的中药煎剂按相应剂量用蒸馏水稀释成一定浓度,各组均按0.2mL/10g灌胃,1次/d,连用3或7次。于用药3d和7d后24h分别采样,每组每次按性别、体重各选取10只小鼠取样。(3)采用血细胞自动分析仪测定试验小鼠的骨髓有核细胞(BMC)和血液生理指标,用1%煌焦油蓝盐水溶液染色、显微镜计数网织红细胞(reticulocyte count, Ret)。(4)采用红细胞C3b受体花环(C3bRR)及免疫复合物花环(ICR)试验检测红细胞的免疫粘附功能。(5)用ELISA方法测定血清免疫球蛋白IgG、IgM,细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ、IL-3、IL-6和EPO的含量。(6)用病理组织学方法观察免疫器官脾脏、胸腺和骨髓的变化。结果:(1)按80mg/kg剂量腹腔注射环磷酰胺,1次/d,连用3d,小鼠的脾脏和胸腺指数显著降低,BMC、WBC、GRA、LYM、PLT显著减少,RBC、HCT和HGB略有降低。(2)试验期间,所有小鼠的BMC呈先升高后降低的趋势,其中骨髓抑制小鼠的BMC变化极显著(P<0.01)。用药3d,高剂量组极显著高于模型组(P<0.01);用药7d,健康对照组极显著高于模型组(P<0.01),显著高于高、中剂量中药复方组和黄芪多糖组。(3)各剂量中药复方及黄芪多糖均可升高骨髓抑制小鼠各类白细胞如GRA、LYM和MID,提高GRA%和MID%,降低LYM%;升高小鼠的Ret、RBC、PLT,提高HGB含量。以中药复方10g/kg剂量灌胃7d效果最佳。(4)用药期间,各试验组小鼠的C3bRR均较用药前降低(P<0.01);ICR变化不显著(P>0.05)。(5)用药后,各剂量中药复方小鼠的IgG、IgM升高,以中剂量用药7d效果最好。(6)中药复方可使小鼠的IL-2保持在较高水平,IFN-γ呈先降低后升高,一定程度抑制IL-4、IL-4/IFN-γ的降低,以中剂量用药7d效果较好。(7)中药复方可使小鼠的IL-3和EPO升高,一定程度抑制IL-6的降低,以中剂量用药7d效果较好。(8)中药复方可改善模型小鼠的临床症状,抑制其体重的降低;可提高模型小鼠脾脏和胸腺的质量及脏器指数;改善脾脏、胸腺和骨髓的病理组织形态,以中剂量用药7d效果较好。结论:(1)按80mg/kg剂量腹腔注射环磷酰胺,1次/d,连用3d,可成功建立小鼠骨髓抑制模型。(2)中药复方具有增强骨髓抑制小鼠造血功能的作用,可以提高骨髓抑制小鼠的BMC、Ret、GRA、LYM、MID、RBC、PLT等,以及血清1L-3和EPO和IL-6的含量;效果以10g/kg剂量,连用7d最佳。(3)中药复方具有促进骨髓抑制小鼠免疫功能恢复的作用,使红细胞C3bRR率恢复,使血清IgG、IgM、IL-2、IL-4含量,IL-4/IFN-γ比值升高,以及提高脾脏、胸腺的质量及脏器系数,促进免疫器官组织形态恢复。
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