第一部分MCMV宫内感染对妊娠和胎仔生长发育的影响【目的】建立小鼠MCMV宫内感染模型，观察MCMV宫内感染对妊娠结局及胎仔生长发育的影响。【方法】（1）MCMV Smith毒株体外细胞培养法传毒增殖，Reed-Muench法计算病毒半数细胞感染剂量TCID₅₀。（2）ELISA法筛查MCMV Ig M、IgG双阴性BALB／C小鼠，雌雄小鼠交配受孕后随机选择孕龄10～11d孕鼠分组：高、中、低病毒感染剂量组各14、12、12只，经胎盘分别接种1×10⁷TCID₅₀、1×16⁶TCID₅₀、1×10⁵TCID₅₀ MCMV悬液；模型对照组12只，同法注射等量无菌3％FCS DMEM培养液，空白对照组12只，开腹只清点孕囊数，不做其他特殊处理。①观察孕鼠一般情况。②处死当日留取母鼠血液行ELISA Ig M检测。③留取胎盘及胎仔脏器组织（脑、肺、肝脏、肾脏），各脏器部分组织行病理学检查，部分组织匀浆液上清体外培养法行病毒学分离。④部分胎盘组织RT-PCR法检测MCMV mRNA和胎仔脏器PCR法检测MCMV DNA。⑤记录各组母鼠妊娠进展及结局。⑥观察仔鼠生长发育情况，称各组胎仔出生时体重及测量身长、头围。【结果】（1）MCMV Smith毒株半数细胞感染剂量为5.62×10⁷TCID₅₀／ml。（2）①高、中、低病毒滴度组孕鼠均出现非特异性病毒血症征象，所有孕鼠MCMV Ig M检测均阳性；模型对照组和空白对照组均为阴性。②感染组胎盘及胎仔脏器组织病毒学分离阳性，相应组织标本出现病理学改变。③感染组胎盘MCMV mRNA检测阳性率为58.49％（30／53），胎仔各脏器MCMV DNA检测阳性率分别为：脑37.73％（20／53）、肺32.07％（17／53）、肝脏22.64％（12／53）、肾脏22.64％（12／53）。（3）①各组孕鼠异常妊娠发生率比较，高、中、低病毒滴度组均要高于模型对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。②各组活胎率比较，高、中、低病毒滴度组均要低于模型对照组，差异有极显著性意义（P＜0.001）。③各组活胎仔出生身长、头围、体重比较，高、中、低病毒滴度组均要低于模型对照组，差异有显著性意义（P＜0.01）；④各组活胎中小头畸形胎仔率比较，高、中、低病毒滴度组高于模型对照组，差异有显著性意义（P＜0.01）⑤各组活胎仔低出生体重胎仔率比较，高、中、低病毒滴度组高于模型对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）。以上各观测指标，模型对照组与空白对照组间差异均无统计学意义（P＞0.05）。【结论】经胎盘接种MCMV可以建立小鼠宫内感染动物模型；MCMV宫内感染增加孕鼠异常妊娠发生率，严重影响宫内胎仔生长发育并导致低出生体重及小头畸形胎仔的发生率增高。第二部分MCMV感染孕鼠T淋巴细胞亚型的影响【目的】观察MCMV感染不同时相孕鼠T淋巴细胞增殖和亚型的改变，了解孕鼠感染MCMV后机体免疫功能的变化规律。【方法】ELISA法筛查MCMV Ig M、IgG双阴性BALB／C小鼠，雌雄小鼠交配受孕后随机选择孕10～11d天孕鼠分组：感染组：20只，经胎盘接种1×10⁶TCID₅₀ MCMV悬液；模型对照组：20只，同法注射等量无菌3％FCS DMEM培养液；空白对照组：20只，不做任何特殊处理的正常孕鼠。于孕第14d、17d、20d、自然分娩当日随机取孕鼠，①经心脏采血行ELISA检测MCMV—IgM。②无菌取脾脏，称取脾脏湿重并行病理学观察。③制备脾细胞，分离单个核细胞（PBMC），培养过夜取悬浮细胞，CCK-8法检测T淋巴细胞体外增殖反应。④流式细胞术检测T淋巴细胞亚型CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T细胞的相对数并计算CD4⁺／CD8⁺比值。【结果】①感染组孕鼠MCMV—IgM检测均阳性，模型对照组和空白对照组均为阴性。②感染组孕鼠脾脏湿重与相应时相模型对照组较，均高于模型对照组，并随感染时间的延长逐渐增加，差异有统计学意义（P＜0.01）。③感染组孕鼠T淋巴细胞增殖反应和相应时相模型对照组比较，要低于模型对照组，差异有显著性意义（P＜0.01）。④感染组孕鼠CD3⁺T细胞的相对百分数与相应时相模型对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；CD4⁺T细胞的相对百分数与相应时相模型对照组比较，孕17d、孕20d、分娩当日均要低于模型对照组，并随着感染时间的延长逐渐降低，差异有显著性意义（P＜0.01）；CD8⁺T细胞的相对数与相应时相模型对照组比较，孕17d、孕20d、分娩当日均要高于模型对照组，并随着感染时间的延长逐渐升高，差异有显著性意义（P＜0.01）；感染组CD4⁺／CD8⁺比值与相应时相模型对照组比较，各时相均要低于模型对照组，并随感染时间的延长逐渐降低，差异有显著性意义（P＜0.01）。以上各检测指标，模型对照组与空白对照组间差异无统计学意义（P＞0.05）。【结论】MCMV感染孕鼠，脾脏T淋巴细胞的变化规律是：CD4⁺T细胞降低，CD8⁺T细胞升高，CD4⁺／CD8⁺比值下降，并与感染时间呈现出一定的时间—效应关系，机体免疫功能处于抑制状态，此免疫抑制状态可能是MCMV垂直传播的免疫机制之一。第三部分MCMV感染对孕鼠NK细胞和CTL活性的影响【目的】观察MCMV感染不同时相孕鼠NK细胞和CTL活性改变，了解孕鼠感染MCMV后体内细胞免疫功能的变化规律。【方法】ELISA法筛查MCMV Ig M、IgG双阴性BALB／C小鼠，雌雄小鼠交配受孕后随机选择孕10～11d天孕鼠分组：感染组：20只，经胎盘接种1×10⁶TCID₅₀ MCMV悬液；模型对照组：20只，同法注射等量无菌3％FCS DMEM培养液；空白对照组：20只，只开腹，不做其它特殊处理的正常孕鼠。于孕第14d、17d、20d、自然分娩当日随机取孕鼠①经心脏采血行ELISA检测MCMV—IgM。②制备脾细胞，分离单个核细胞（PBMC），培养过夜取贴壁细胞，CCK-8法检测NK细胞的杀伤活性。③制备脾细胞，分离单个核细胞（PBMC），培养过夜取悬浮细胞，ELISPOT法检测CTL活化功能及CCK-8法检测CTL的杀伤活性。【结果】①感染组孕鼠MCMV—IgM检测均阳性，模型对照组和空白对照组均为阴性。②感染组孕鼠NK细胞的杀伤活性与相应时相的对照组比较，孕14d时要高于对照组，其余时相均低于模型对照组，并随感染时间的延长逐渐降低，差异有极显著性意义（P＜0.001）。④感染组孕鼠CTL产生的斑点频率与相应时相模型对照组比较，均低于模型对照组，并随感染时间的延长逐渐降低，差异有极显著性意义（P＜0.001）；CTL的杀伤功能与相应时相的模型对照组比较，孕17d至分娩各时相均低于模型对照组，并随感染时间的延长逐渐降低，差异有极显著性意义（P＜0.001）。【结论】MCMV感染孕鼠，NK细胞的杀伤活性受到抑制，CTL的活化和杀伤功能亦明显受到抑制，并与感染时间呈现一定的时间—效应关系，母体抗MCMV的细胞免疫功能处于抑制状态，此免疫抑制状态可能是MCMV宫内传播免疫机制之一。