脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol, DON)是由多种镰刀属真菌代谢产生的单端孢霉烯族化合物。随着小麦赤霉病的发生,DON的污染广泛分布于世界各地,是食品和饲粮中污染率最高的霉菌毒素之一。蓄积在粮食中的DON被人畜摄食后,多表现出急性的呕吐和拒食反应,并且对机体产生生长抑制、免疫抑制、胚胎和细胞毒性,对畜禽和人的健康危害极大。因此,对农产品和食品中DON的检测具有重要意义。本实验通过噬菌体抗体库技术筛选到抗DON的单链抗体,并进行初步的原核表达,为噬菌体单链抗体在DON检测中的应用奠定了良好的基础。试验Ⅰ脱氧雪腐镰刀菌烯醇人工抗原的合成通过琥珀酸酐在DON的3位羟基上引入琥珀酸连接臂,采用活泼酯法在连接臂上偶联牛血清蛋白BSA制备免疫抗原DON-HS-BSA。采用CD[法直接偶联DON和卵清白蛋白OVA制备检测抗原DON-OVA。通过紫外吸收光谱法和DON的ELISA检测试剂盒鉴定偶联成功。试验Ⅱ DON杂交瘤细胞的制备与鉴定以DON-HS-BSA为抗原免疫BALB/c,取免疫后小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0进行融合,制备杂交瘤细胞,以OVA-DON为检测抗原,采用问接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞,使用有限稀释法进行阳性细胞亚克隆。结果表明,免疫小鼠血清效价最高为1：2000；筛选出1株稳定分泌IgG2a,轻链为λ链的DON杂交瘤细胞株。试验Ⅲ DON噬菌体单链抗体库的构建、筛选和原核表达以DON杂交瘤细胞为基因来源,利用设计引物,经RT-PCR扩增小鼠IgG的重链、轻链可变区基因,并通过(Gly4Ser)3多肽Linker拼接VL-Linker-VH,并扩增得到单链抗体ScFv基因片段。利用Sfi I和Not I双酶切后连接ScFv基因和噬菌粒载体pCANTAB5E,转化大肠杆菌E.coli TG1,经辅助噬菌体M13K07进行噬菌体拯救构建DON噬菌体单链抗体库。用DON检测抗原进行phage-ELISA,对噬菌体重组抗体进行免疫亲和、富集和筛选。结果表明,经过三轮富集后,富集倍数为144倍,抗体库滴度达到7.7×107cfu/mL。并筛选出一株DON特异性单链抗体的菌株。阳性噬菌体转染宿主菌E. coli HB2151后,通过诱导条件优化,发现其可溶性诱导温度确定为25℃,IPTG最佳诱导浓度为1.0mmol/mL,所表达的抗体蛋白大小约为35kDa。